高效液相色谱法（仪器分析课件）.pptx

高效液相色谱法;;能力目标;知识目标;素质目标;;新闻背景;讨论:如何对化妆品中的防腐剂进行检测;新方法引出;;;一、液相色谱的种类;液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography;液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatography;离子交换色谱

ion-exchangechromatography;离子色谱

ionchromatography;离子对色谱

ionpairchromatography;空间排阻色谱

size-exclusionchromatography;亲和色谱

Affinitychromatograph;高效液相色谱法;;;认识液相色谱仪

highperformanceliquidchromatograph;结构原理图;HPLC仪器包括：

1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）

2．高压泵（输液泵）

3．进样装置

4．色谱柱——分离

5．检测器——分析

6．废液出口或组分收集器

7．记录装置;;贮液罐材料：应当耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮（PEEK）。

贮液罐容积：0.5-2.0L。

要求：

贮液罐放置位置要高于泵体，以保持一定的输液静压。

贮液罐在使用中应密闭，以防溶剂蒸发，引起流动向组成的变化，并可防止空气中的CO2，O2重新溶解于脱气的流动相中

;⑤在线真空脱气法将真空脱气装置串接到贮液罐于高压泵之间，实现溶剂在进入高压泵之前的连续脱气。脱气效果最优。;2.恒流高压输液泵;输液泵相关概念：梯度淋洗;3.进样装置;4.分离柱;5.检测器;紫外检测器;光电二极管阵列检测器;示差折光检测器;荧光检测器;高效液相色谱法;;;;基质（担体）

HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。

无机物基质主要是硅胶和氧化铝。无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。

有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。;1．基质的种类

（1）硅胶

硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。

硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。

通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2～8。;硅胶的主要性能参数有：

①平均粒度及其分布。

②平均孔径及其分布。与比表面积成反比。

③比表面积。在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。

④含碳量及表面覆盖度（率）。在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。

⑤含水量及表面活性。在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。

⑥端基封尾。在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。

⑦几何形状。硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差；后者无此缺点。

⑧硅胶纯度。对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。;（2）氧化铝

具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。;（3）聚合物

以高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙烯酸酯为基质的填料是用于普通压力下的HPLC，它们的压力限度比无机填料低。苯乙烯-二乙烯苯基质疏水性强。使用任何流动相，在整个pH范围内稳定，可以用NaOH或强碱来清洗色谱柱。甲基丙烯酸酯基质本质上比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更强，但它可以通过适当的功能基修饰变成亲水性的。这种基质不如苯乙烯-二乙烯苯那样耐酸碱，但也可以承受在pH=13下反复冲洗。

所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。用于HPLC的高交联度聚合物填料，其膨胀和收缩要有限制。溶剂或小分子容易渗入聚合物基质中，因为小分子在聚合物基质中的传质比在陶瓷性基质中慢，所以造成小分子在这种基质中柱效低。对于大分子像蛋白质或合成的高聚物，聚合物基质的效能比得上陶瓷性基质。因此，聚合物基质广泛用于分离大分子物质。;2．基质的选择

硅胶基质的填料被用于大部分的HPLC分析，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物质，主要用来制成分子排阻和离子交换柱。;常见固定相-----化学键合固定相;常见固定相-----化学键合固定相;液相色