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实验荧光分光光度法测定维生素B2含量

原理:

有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和

强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧

光。

荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。由于物质分子结构不同，所吸收的紫

外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行

定性分析。

同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧

光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质

进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。

测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度

计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限

低，可以达到10-12g／mL，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。

仪器：

荧光分光光度计

光源：

为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在

300nm～400nm范围内强度几乎相等，故较常用。

激发单色器：

置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光

谱。

发射单色器：

置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色

器。筛选出特定的发射光谱。

样品室：

通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体

时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

检测器：

一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。

荧光分光光度计既可以测液体，又可以测固体

样品仓：

样品盘：

荧光分光光度计另一侧连着电脑,通过电脑工作站设置测试参数并显示,记录数

据.

操作步骤：

1打开电脑，打开仪器，预热20分钟

2制样

制备样品，打开样品盘，石英面一侧朝下，将待测样品平铺整个石英片，盖

上盖子，拧紧，注意，一定不要将石英片弄碎。

3打开软件

首先对仪器参数进行设定

点击右上角的method，选择instrument选项卡，设置具体参数，设置完成

后点击完成。

4测量

打开样品仓，将样品盘放入样品仓，盖紧仓门。

5点击右侧的pre-scan进行预扫

预扫结束后，出现ready提示，点击measure进行测量

6分析数据定性或定量

7保存数据

测量结束后会自动弹出测量结果窗口，点击左侧File-Saveas输入样品名，

选择保存位置以及保存类型，点击保存

8如需继续测量，只需要将样品盘的样品更换，重复刚才的步骤即可。

9测量结束后先关闭软件，再关闭仪器和电脑。

10清理样品盘，收拾桌面。整理好实验室