食品中大肠菌群的测定.ppt

?（3）平板菌落数的选择选取菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。

2、平板计数第32页,共62页，星期六，2024年，5月?（4）、证实试验

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h-48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

2、平板计数第33页,共62页，星期六，2024年，5月?（5）大肠菌群平板计数的报告

经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠菌群数。2、平板计数第34页,共62页，星期六，2024年，5月例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。第35页,共62页，星期六，2024年，5月国标4789.3的08版与03版主要不同1、名称更改以大肠菌群计数代替原来的大肠菌群测定。2、增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法。3、大肠菌群的MPN法以乳糖为主改为以月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤为主的要培养基的MPN法。4、大肠菌群的MPN法中原“报告每100ml（或g）大肠菌群的MPN值”改为“报告每1ml（或1g）大肠菌群的MPN值”。第36页,共62页，星期六，2024年，5月比较区别GB/T4789.38--2008大肠杆菌的计数第37页,共62页，星期六，2024年，5月03版??流程

第38页,共62页，星期六，2024年，5月第39页,共62页，星期六，2024年，5月一、??步骤取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成1:10的均匀稀释液为检样。第40页,共62页，星期六，2024年，5月同一稀释度在做菌落总数测定的同时接种乳糖胆盐发酵管，并且用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照。第41页,共62页，星期六，2024年，5月1、乳糖发酵试验

根据食品卫生要求或对检样污染程度的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。第42页,共62页，星期六，2024年，5月接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。第43页,共62页，星期六，2024年，5月置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进行。

第44页,共62页，星期六，2024年，5月2?、分离培养

将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。第45页,共62页，星期六，2024年，5月可疑菌落特点：具有金属光泽的深紫黑色菌落；不带或略带金属光泽的菌落；中心色较深的淡紫黑色菌落。第46页,共62页，星期六，2024年，5月3?、证实试验

在上述平板上挑取可疑大肠菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱培养24±2小时,观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。第47页,共62页，星期六，2024年，5月4?、报告

根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。第48页,共62页，星期六，2024年，5月二、结果

????根据证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表(见附录)报告每100ml(克)大肠菌群的最可能数。第49页,共62页，星期六，2024年，5月三、注意事项1、第一步乳糖胆盐发酵试验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，初发酵阳性管，经过后两步，有可能成为阴性。只做一步，会有相当多的合格样品作为不合格处理，应注意。第50页,共62页，星期六，2024年，5月2、胆盐可抑制革兰氏阳性菌的生长，有利于大肠杆菌的生长繁殖。第51页,共62页，星期六，2024年，5月3、接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。第52页,