医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测专家讲座.pptx

器材准备;自然界中微生物;医学微生物学试验

综合性试验三(P38);空气细菌学检验P38;试验方法：自然沉降法是依据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力作用下，以垂直自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（colonyformingunit，CFU），了解空气污染情况。

试验步骤：每组1块平板，选择采样地点（试验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标识。37℃温箱培养24小时，观察结果。

★CFU/m3＝50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。

N：平板上菌落数。A：平板面积(平方厘米)。

T：采样时间(分钟)。;空气细菌学检验;手指皮肤细菌学检验P41;医务人员，经常要与病人接触，不论是直接接触，还是间接接触，都有传输病菌可能。即使病菌直接起源是患者,不过造成病菌扩散主要路径则是气溶胶和医务人员手。所以，经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染主要方法。

实际上，预防感染办法中，最简单又十分有效方法就是洗手。据测定，只用自来水洗手可使暂住菌总数降低40%，用肥皂洗手可降低80%以上。

洗手？;常规洗手方法（甲和丙操作）;医学微生物学试验室标准洗手方法（乙和丁操作）;1.掌心对掌心搓擦2.手指交织掌心对手背搓擦3.手指交织掌心对掌心搓擦;医务人员洗手指征;;医学微生物学试验

综合性试验一(P2);常见病原性球菌检验程序P47：

直接涂片、革兰染色、镜检

脓汁、痰、咽部分泌物观察菌落性状、溶血性、色素

血琼脂平板培养涂片染色镜检

挑取可疑菌落生化反应

↑纯培养动物试验

药敏试验

血液、穿刺液→肉汤增菌培养→培养液涂片染色境检

常见肠道致病菌检验程序P48：

粪便→SS琼脂、伊红美蓝平板培养→挑取可疑菌落

↑↓血清学判定

血、骨髓→增菌培养双糖铁培养基染色镜检

生化反应

;平板划线分离法：

借助于划线，将混杂各种细菌，在固体培养基表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见细菌集团。

☆在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不停增值稠密群体称为单菌落。

☆在固体培养基表面，由多个菌落融合在一起形成细菌堆积物,称为菌苔。;平板分区划线分离法步骤（5区）

接种环烧灼灭菌，以免污染标本。

取标本在平板表面上方密集涂布5～10mm2。

烧掉接种环上多出标本（火焰后面烤干→烧灼）。

晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，方便控制划线。

接种环与平板呈30～40度角，经过密集涂布部分1～3次，使接种环重新沾上少许标本(细菌)，然后在平板表面，以曲线形式，作大幅度往返连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。

转动平板，接种环经过第一区1次，一样方法划第二区。如此依次划完3～5区。

接种环烧灼灭菌（火焰后面烤干→烧灼），以免污染环境。

将平板倒置（盖在下，底朝上），37℃培养18～24h。

★要充分利用平板面积，5区间隔尽可能小，不能划破琼脂。;;平板划线分离法P8;试验分组;接种环烧灼灭菌;接种环直径3mm;;;;;;37℃培养24小时;37℃培养24小时;37℃培养24小时;37℃培养24小时;安全警告;思索题;试验内容;惯用器材摆放次序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。

试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机次序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。

※器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。;酒精棉球;试验室器材整齐有序