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[生物]基因枪法转化水稻的研究进展的论文
水稻(oryzasativa)是世界上最主要的粮食作物之一。近年来,dna重组技术、遗传操作
技术、水稻基因图谱的研究取得了显著发展,美国monsanto公司2000年4月、syngenta
公司2001年2月先后宣告完成粳稻日本晴(nipponbare)基因组测序草图。我国也已宣布完成
籼稻9311的序列框架图。目前以大规模分离、鉴定基因组序列功能为特征的水稻功能基因
组研究正在迅速发展,而这一研究之后必然是依托于高效的水稻遗传转化体系,因此水稻遗
传转化研究越来越成为人们关注的焦点。
水稻遗传转化体系已比较完善,农杆菌介导法、基因枪法、peg法、花粉管通道法等方
法均在水稻遗传转化中应用并获得转基因植株,但目前用的最多的方法是基因枪法和农杆菌
介导法。禾谷类作物由于不是农杆菌的天然宿主,曾一度限制了农杆菌介导法转化水稻。基
因枪法由于其没有宿主限制,对单子叶和双子叶植物都能进行有效地转化,因而得到了很大
的发展。本文就基因枪法的基本原理及其优缺点、影响基因枪法转化水稻的几个关键因素、
外源基因的遗传特性及存在的问题等方面作简要综述。
1基因枪法的原理及优缺点
基因枪法的原理
基因枪法(pariclegun)又称微弹轰击法(micro-projecticlebombardment,particle
bombardment,orbiolistics)。其基本原理是将外源dna包被在微小的金粒或钨粒表面,然后
在高压的作用下,微粒被高速射入受体细胞或组织,微粒上的外源dna进入细胞后,整合到
植物染色体上,得到表达,从而实现基因的转化。
基因枪法的优、缺点
基因枪法的优点
(1)无宿主限制。基因枪法本质上是一种物理过程,没有宿主限制,对单子叶和双子叶
植物都能进行有效地转化。以原生质体为受体的peg转化法、电击法、脂质介导转化法和显
微注射法等虽然可以用于单子叶植物的转化,然而,以原生质体作为受体材料要求受体系统
具有良好的再生性能,这对于大多数禾谷类作物来说是较困难的,而且其再生的周期比较长,
再生过程容易产生变异。
(2)靶受体类型广泛,不受组织类型限制,几乎所有具有潜在分生能力的组织或细胞都
可以用基因枪进行轰击转化。目前用于基因枪转化的受体材料十分广泛,其中包括原生质体、
悬浮细胞、根或茎的切段、叶圆片、成熟胚、幼胚、分生组织、愈伤组织、胚芽鞘等几乎所
有具有潜在分化能力的组织或细胞。
(3)可控度高,采用高压放电或高压气体驱动的基因枪,可根据实验需要,将载有外源
dna的金属颗粒射入特定层次的细胞(如再生区的细胞),使转化细胞能再生植株,从而提高
转化频率。
(4)操作简便、快速。农杆菌介导法需要进行农杆菌感受态细胞的制备、共培养、抑菌
等操作步骤,peg转化法、电击法等需要进行原生质体分离与培养的繁琐工作,而基因枪法
是一种物理过程,只要在无菌的条件下将载有外源基因的金属颗粒轰击受体材料,就可以进
行筛选培养,因此它操作简便、快速。
基因枪法的缺点
由于基因枪轰击的随机性,外源基因进入宿主基因组的整合位点相对不固定,拷贝数往
往较多,这样转基因后代容易出现突变、外源基因容易丢失,容易引起基因沉默等现象的发
生,不利于外源基因在宿主植物的稳定表达。而且基因枪价格昂贵、运转费用高。
2影响基因枪法转化水稻的几个关键因素
水稻的基因型
栽培稻主要有籼稻和粳稻两个亚种,其中籼稻品种是热带和亚热带地区的主要粮食作
物,由于籼稻的组织培养特性及再生能力都与粳稻存在较大差别,在转化过程中,籼稻的转
化效率显著低于粳稻。李良材等用14个粳稻品种和23个籼稻品种进行了转化实验,其中所
用的粳稻都得到转基因植株,平均转化率为10%左右,而籼稻只有14个得到转基因植株,
7个只得到转基因愈伤组织,尚有2个未产生反应,转基因植株的转化频率只有2%~3%,
明显低于粳稻。
外植体类型
用于基因枪转化的受体材料十分广泛,几乎所有具有潜在分裂分化能力的组织和细胞都
可以作为受体材料,但要想获得理想的转化结果,根据水稻品种的不同,选择适当的转化受
体材料是十分关键的。目前最常用的水稻基因枪转化受体材料包括成熟胚、幼胚、花药和幼
穗。成熟胚的取材不受生长季节的限制.因而
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