酶分子的化学修饰.ppt

感谢大家观看第64页,共64页，星期六，2024年，5月************烷基化反应第32页,共64页，星期六，2024年，5月2)酰基化反应试剂特点：含有结构，作用于侧链基团上的亲核基团，使之酰基化。可作用基团：氨基，巯基，醇羟基（Ser、Thr），酚羟基（Tyr）第33页,共64页，星期六，2024年，5月酰基化反应第34页,共64页，星期六，2024年，5月3)氧化和还原反应试剂特点：具有氧化性或还原性。氧化剂：H2O2可被氧化的侧链基团:巯基，甲硫基，等。还原剂：2－巯基乙醇、DTT等。可被还原的侧链基团：二硫键。第35页,共64页，星期六，2024年，5月氨基酸侧链基团修饰剂Lys氨基三硝基苯磺酸，2，4－二硝基氟苯、碘乙酸、碘乙酰胺、丹磺酰氯、亚硝酸Asp、Glu羧基水溶性碳化二亚胺Arg胍基苯乙二醛，1,2－环己二酮、丁二酮Cys巯基碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺二硫键巯基乙醇、DTTHis咪唑基焦碳酸二乙酯、碘乙酸Tyr酚羟基碘、四硝基甲烷Trp吲哚基N-溴代琥珀酰亚胺各种氨基酸侧链的修饰剂第36页,共64页，星期六，2024年，5月第三节酶蛋白侧链的大分子修饰常用修饰剂：聚乙二醇(PEG)、右旋糖苷、环糊精、蔗糖聚合物(Ficoll)、肝素、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚丙烯酸(PAA)、聚氨基酸、等。活化：修饰剂的活化，即制备修饰剂衍生物。偶联：与酶蛋白偶联反应。第37页,共64页，星期六，2024年，5月proteinHalflifeinvivo(h)Injections/weekα-IFNβ-IFNHGHEPOG-CSFGM-CSF5.60.60.3652337377各类蛋白类药物的体内半衰期及注射次数第38页,共64页，星期六，2024年，5月IFN-α2aand40kDa(PEG)–IFN-α2a的药代动力学第39页,共64页，星期六，2024年，5月酶半衰期相对稳定性天然SOD6min1右旋糖酐-SOD7h70Ficoll(低分子量)–SOD14h140Ficoll(高分子量)–SOD24h240聚乙二醇-SOD35h350蛋白类药物修饰后的半衰期及稳定性第40页,共64页，星期六，2024年，5月1.PEG（PolyethyleneGlycol）简介：①?具有两亲性;②?无毒，免疫原性低;③?分子量范围很宽，从几百到数十万，选择余地大;修饰剂一般为500～20000④?可以将它的许多优良性质:如亲水性，柔性、抗凝血性、抗巨噬细吞噬性等，赋予修饰后的生物分子。H(-O-CH-CH)n-OH第41页,共64页，星期六，2024年，5月为避免在修饰过程中发生交联和团聚，通常采用单甲氧基聚聚乙二醇(mPEG)作为修饰剂。CH3(-O-CH-CH)n-OH第42页,共64页，星期六，2024年，5月第43页,共64页，星期六，2024年，5月2.PEG的活化1)三氯均嗪法MPEG1MPEG2均三嗪，三聚氯氰第44页,共64页，星期六，2024年，5月消化酶作用下的过氧化氢酶的活性保留第45页,共64页，星期六，2024年，5月2).N-羟基琥珀酰亚胺法第46页,共64页，星期六，2024年，5月第47页,共64页，星期六，2024年，5月第一代PEG衍生物：反应选择性低；修饰后蛋白药物的抗原性和半衰期改进效果不明显；容易引发蛋白质的交联与团聚；衍生物与药物反应形成的连接键稳定性不高。第48页,共64页，星期六，2024年，5月1.N-末端氨基修饰PEG-醛蛋白质N端α氨基的pKa为7.6~8.0，而分子内赖氨酸的ε-氨基的pKa为10.0~10.2mPEG-醛与N端氨基的偶联第二代PEG衍生物第49页,共64页，星期六，2024年，5月2.疏基修饰①PEG-马来酰亚胺②PEG-吡啶-二硫醚；③PEG-乙烯基砜④PEG-碘乙酰胺。第50页,共64页，星期六，2024年，5月3.羧基端的修饰mPEG-酰肼或mPEG-胺mPEG-酰肼与羧基的偶联第51页,共64页，星期六，2024年，5月枝形PEG单链叉