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高效液相色谱基线的各种问题

高效液相色谱基线的各种问题

L、基线漂移

原因解决方法

原因解决方法

1

1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检

测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）

1

1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图

2

2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）

2

2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦

气。

3

3、流通池被污染或有气体

3

3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4

4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

4

4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5

5、流动相配比不当或流速变化

5

5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

6

6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱

子进行冲洗。

7

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

7

7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的

基线。

8

8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。

9

9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

10

10、将波长调整至最大吸收波长处

M

M、基线噪音（规则的）

原因解决方法

原因解决方法

1

1、在流动相、检测器或泵中有空气

1

1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2

2、漏液图2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正

常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3

3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）

4

4、减少差异或加上热交换器

5

5、在同一条线上有其他电子设备

5

5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6

6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器

N

N、基线噪音（不规则的）

原因解决方法

原因解决方法

1

1、漏液图1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的

噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

2

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

2

2、检查流动相的组成。

3

3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相

4

4、检测器/记录仪电子元件的问题

4

4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

5

5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统

6

6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7

7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）

7

7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8

8、检测器灯能量不足8、更换灯

9

9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱

10

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常

10

10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

O

O、宽峰

原因解决方法

原因解决方法

1

1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相

2

2、流动相流速太低2、调节流速

3

3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）

3

3、见section3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果

必要更换密封。

4

4、检测器设定不正确4、调整设定

5

5、柱外效应影响

a

a、柱子过载

b

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d

d、记录仪响应时间太长

5

5、a、小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品

b

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c

c、使用内径为0.007-0.01的短管路

d

d、减少响应时间

6

6、缓冲液浓度太低6、增加浓度

7

7、保护柱污染或失效7、更换保护柱

8

8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

9

9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

10

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰

10

10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11

11、柱温过低11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃

12

12、检测器时间常数太大