血吸虫病免疫诊断技术规范.pptxVIP

血吸虫病免疫诊疗技术

------现场应用技术规范;一、当前惯用血吸虫病免疫诊疗类型与方法;二、未稍采血（塑料管法）操作规程;3．采血方法

1）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用75%酒精棉球消毒皮肤。

2）待干后用左手固定采血部位，右手持消毒针快速刺入皮肤2-3mm，取

出刺针，血液即自行溢出。如血流不畅，可于四面稍加压力。

3）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出血即可采取。

4）用塑料管进血口靠近血滴让血液自行流入管内，采集＞3cm血液(一次检测)。

5）采血完成，刺处用消毒棉球拭擦洁净。

6）采血后塑料管将进血端留一小段空隙，靠近酒精灯烧熔管口，用镊子轻

轻夹住已基本溶化采血管进血端约10秒,将进血端牢牢封住,贴上标签。

7）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或离心后，剪去塑料管之

血球部分，将血清移至中部，用于检测。或两端封口后放冰箱保留备用。;4．注意事项

采血部位要严格消毒，做到一人一针；采血针忌用注射针头；采血针刺入速度要快速；有炎症部位不能采血；采血时切忌用力挤压；采血后伤口继续出血应用干棉球压迫；

用塑料管搜集血液时应尽可能防止空气进入管内;假如空气进入管内可将塑料管另一端位置提升,以排除空气,然后继续采集血液到指定位置

可用普通离心机低速(1000-1500转)离心5分钟,以分离血清，预防离心过速或过长。

塑料管封口要严密，预防血液流失。

用剪刀剪塑料管时应保持剪刀清洁，防止交叉污染。

分离后血清（或血浆）样品可置冰箱保留。

试验废弃物应按摄影关要求处理，禁止随意丢弃。

;三、间接红细胞凝集试验(IHA)操作规程;2冻干致敏红细胞制备工艺;3试验操作准备;器材：

1.移液器100μl一支、1000μl（1ml）一支、配套吸头、吸头盒及移液器架等

2.“V”型反应板一块、白纸一张、记号笔

3.旋转震荡器一台

4.温箱一台

5.试验统计纸、统计笔、废弃物杯

5)试验准备要求：

待检血清（或血浆）要新鲜，不能有溶血或混有红细胞。

应选择“V”型，底角为90度反应板。不要选择“U”型及不一样底角“V”型反应板。

“V”型反应板要清洁、不潮湿，反应孔???好光洁。

试剂盒在使用期内;4试验操作步骤;

7）调整移液器为25μl。血凝反应板纵向（列）第2～4孔各加标本稀释液

25μl。加液完成，检验每孔是否有漏加孔或加双倍孔，并及时纠正。8）于第一排第1孔加1号待测血清25μl，加完血清（盖上盖子）放回原处，

充分混匀（吸打4次，混匀吸打在第一档进行，移液吸头不能触碰反应孔

底壁）,使血清成1﹕5稀释。（加血清时要查对一下样本编号预防加错

位）。

9）在第1孔吸出25μl于第2孔（纵向），同上混匀使血清成1:10稀释。后吸出

25μl于第3孔（纵向），同上混匀使血清成1:20稀释。后吸出25μl于第4

孔纵向），同上混匀使血清成1:40稀释,后吸出25μl弃去，自动卸去吸头。

同上操作进行第2～n号样本、阴性对照、阳性对照倍比稀释。倍比稀释

一个样本一个吸头。

;;5结果判定;4）血凝反应强度判定以下：?

－：红细胞全部下沉在孔底，形成肉眼可见紧密、边缘光滑小圆点。?

＋：多数红细胞下沉在孔底形成圆点，周围可见少许凝集红细胞，肉眼见周围含糊(或中间出现较为显著空白点)。?

＋＋：孔底中心可见少许红细胞下沉小圆点，多数凝集红细胞在孔底周围形成小薄层

＋＋＋：红细胞形成薄层凝集,边缘展现不规则皱褶。;6注意事项;1基本原理;血吸虫病免疫诊断技术规范;血吸虫病免疫诊断技术规范;2试验操作准备;3试验操作;7）将整板放手上轻轻震荡，加血清一分钟（含混匀时间）后加试纸条。

8）取试纸条插入小杯中，待小杯内反应液吸干后观察结果（15分钟）。

9）在光线充分但非强光下观察，正面面向试纸条观察（阳性检测带普通

在对照带下0.9cm处，插入杯底斜靠时普通在PVC小杯上沿略上处，防

止误判），观察结束放回原处，统计结果。

10）试验台面清理：未使用试剂、未使用吸头、移液器（刻度复原至最高

档）等放回原处；试验废物放入要求搜集器内。

;4要求;5结果判断;五、酶联免疫吸咐试验（ELISA）操作规程;1基本原理;2试验操作准备;5）试验器材：

移液器20μl、100μl、1000μl各一支、200μl、1000μl吸头及吸头盒和移液器架

样品稀释板

酶标板架

塑料洗瓶（装蒸馏水）

恒温水浴箱一台

吸水纸、废弃物杯

试验统计纸、统计笔、记号笔、剪刀

6）血清样本检验，要求：1待检血清要新鲜，不能有溶血或混有红细胞