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生物化学综合实验实验报告

工程名称：核酸的别离纯化及性质研究

指导老师：商亚芳

班级：食品科学与工程类13-04班

姓名：刘澎

学号：2013218669

日期：2015/07/02-07/03

小组成员：刘澎徐成

合肥工业大学

核酸的别离纯化及其性质研究

摘要：为了提取植物组织和动物肝脏中的DNA，我们先破碎了细胞，提取了脱氧核糖和蛋白〔DNP〕，再将蛋白质去除。然后利用阴离子去垢剂SDS使DNA与蛋白质进行别离，用氯仿-异戊醇去蛋白质蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。将提取出来的粗DNA进过屡次纯化，再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度时发现提取出来的DNA纯度比拟低。之后通过琼脂糖凝胶电泳别离DNA，最后通过紫外线观察所跑出来的条带发现其中一条带并不是很清晰。

Abstract：InordertoextractDNAfromplanttissuesandanimalliver,wefirstbreakthecellsandextractedtheDNAandprotein(DNP),andthenremovedtheprotein.ThenusinganionicdetergentSDStoproteinandDNAwereseparated.UsealcoholMixturetomakeproteindenaturation,andthenplaceitonthecentrifugalmachinetoremovetheprotein,finallywithethanolandtheDNAprecipitatedfromtheextract.WeextractthecrudeDNAintoanumberofpurification,andthenusetheDNAUVabsorptioncharacteristicsofDNAspuritywasfoundtoextracttheDNApurityishigher..WewerefinallyseparatedbyagarosegelelectrophoresisofDNA,andthelastoneofthebandswasfoundtobenotveryclear.

关键词：核酸别离提取纯化电泳

Keywords：DNASeparateextractionpurificationelectrophores

前言：核酸〔nucleicacid〕是遗传信息的携带者，是基因表达的物质根底。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最根本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。核酸是生物体内的一种大分子化合物，与生物的生长、发育、繁殖、遗传与变异有密切关系，是蛋白质生物合成不可缺少的物质，因此，核酸的提取一直应用于遗传工程上。目前,人们已发现,除了遗传学上的用途外,核酸制剂还可广泛应用于医学、食品工业上，核酸及其衍生物具有有效的抗癌作用。所以核酸的别离纯化，一直广受大家的关注，本次试验就是以植物和动物作为实验材料，来进行核酸的分理纯化及性质研究。

植物组织中核酸的别离与纯化原理：

DNA存在于细胞的细胞核中，且DNA大局部是以脱氧核糖和蛋白的形式存在于其中。所以为了提取植物组织和动物肝脏中的DNA，我们先提取了脱氧核糖和蛋白〔DNP〕，再将蛋白质去除。然后利用阴离子去垢剂SDS使DNA与蛋白质进行别离，再用含少量异戊醇的氯仿去除蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。DNP与核糖核蛋白〔RNP〕在不同浓度的电解质溶液中溶解度差异非常大，我们可以利用这一特点将二者进行别离。通常可用1mol/LNaCl提取DNA。为了进一步纯化DNA,我们可用适量的RNase来处理提取液，从而降解DNA中掺杂的RNA.因为在提取过程中DNA可能被细胞中释放出来的DNase分解或者DNA发生变性，所以整个提取过程都应该在较低的温度下进行，同时研磨缓冲液中参加柠檬酸三钠和Na2-EDTA抑制DNase的活性。我们一般要通过紫外吸收，化学测定和电镜观察等方面来测定提取的DNA是否为纯洁，双链，高分子化合物。本实验采用紫外吸收法。

肝脏中DNA的提取及纯度鉴定原理：

本实验采用动物新鲜肝脏为提取DNA的