deae纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白.pptxVIP

deae纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白;蛋白质分离纯化;试验目标;试验内容;第一个别;此次试验目标;依据待分离物质带电性质不一样分离纯化方法。

以离子交换剂为固定相，特定离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂结协力不一样进行分离纯化层析方式。;;离子交换剂;离子交换剂选择;cation;起始缓冲液选择;洗脱液;deae纤维素离子交换层析纯化血清白蛋白;人血浆蛋白质等电点及分子量;试验原理;材料与试剂;试验步骤;2、DEAE—纤维素层析纯化白蛋白

1）上样：将4ml用缓冲液稀释后血清样品加入上述已平衡好层析柱表面，使样品进入柱床内。小心用4ml0.06mol/LNH4Ac缓冲液洗涤沾在管壁上蛋白质样品，使其进入床内。

2）穿流峰洗脱：连接层析系统，继续用0.06mol/LNH4Ac缓冲液（pH6.5）洗脱未吸附到层析柱上蛋白，直到统计仪基线基础恢复到原始位置。然后将柱中缓冲液面降至与柱床表面平齐。

3）白蛋白纯化：改用0.3mol/LNH4Ac缓冲液（pH6.5）洗脱。每管1ml分部搜集(调整个别搜集器时间为1min/tube)。合并蛋白质浓度高2-3管，用于后续蛋白质纯度判定。

因为纯化白蛋白依然结合有少许胆色素等物质，搜集蛋白质为肉眼可见浅黄色液体。

4）再生平衡：改用1.5mol/LNaCl—0.3mol/LNH4Ac缓冲液洗脱，至统计仪基线基础恢复到原始位置后，再用40ml0.06mol/LNH4Ac（pH6.5）洗脱平衡即可。;Samplediagramofagelfiltrationsystemwithgravityfeed.

Thesafetyloopisdesignedtokeepthecolumnfromrunningdryifleftunattended.;;BSZ-100自动部份搜集器结构与使用方法;HD-3紫外检测仪使用方法;LM17型统计仪使用说明;统计紫外检测仪所显示峰值，在洗脱曲线上标示出所更换溶液、峰值及各个峰含义，分析试验结果

绘制试验装置图

;下周试验