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模块七饲料检测技术
单元二饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。二、测定原理
三、所需试剂1、硫酸(GB625)2、混合催化剂3、氢氧化钠(GB629)4、硼酸(GB628)5、混合指示剂6、0.02mol/l盐酸标准溶液7、蔗糖(HG3—1001)8、硫酸铵(GB1396)9、硼酸吸收液
混合催化剂混合指示剂
盐酸标准液加混合指示剂的硼酸
氢氧化钠溶液蒸馏水
四、仪器设备
牧医工程学院精品在线课程电子天平滴定筒
通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶容量瓶
凯氏烧瓶洗瓶
刻度吸管移液管
量杯
半微量凯氏蒸馏装置
五、试样的选取制备??选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化。
六、分析步骤(1)试样的消毒:称取试样0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入凯氏烧瓶中,加入6.4g混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360~410℃)直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h。
(2)氨的蒸馏—半微量蒸馏法将试样消煮液冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20mL注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。
蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵,代替试样,按上述两种步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为21.19%±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
滴定用半微量蒸馏法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
(二)空白测定取蔗糖0.5g,代替试样,按以上步骤进行空白测定,消耗0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过0.3ml。
(三)分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25%以上时,允许相对偏差为1%。当粗蛋白质含量在10%-25%之间时,允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时,允许相对偏差为3%。
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