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DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制

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30mM

30mMEDTA

36%(V/V)丙三醇

0.05％(W/V)溴酚蓝

pH＝7.0

配制量：

配制方法：

100ml

用移液器吸取6mlEDTA(500mM，pH8.0)加入约50mlddH2O中

再吸取5ml1%的溴酚蓝

量取36ml丙三醇

用2NNaoH调pH至7.0

定容至100ml，4℃

6×上样缓冲液

LoadingBuffer

配方：

10mM

10mMEDTA

50%(V/V)丙三醇

0.25%(W/V)溴酚蓝

配制量：

配制方法：

100ml

用移液器吸取2mlEDTA(500mM，pH8.0)加入约40mlddH2O中

再称取250mg的溴酚蓝

量取50ml丙三醇

定容至100ml，4℃

10×上样缓冲液

LoadingBuffer

配方：

1%(W

1%(W/V)溴酚蓝

配制量：

配制方法：

100ml

称取1g溴酚蓝置于烧杯中

加入约80ml的ddH2O，溶解完全

定容至100ml

转移至棕色容器中

避光，4℃

1%(W/V)溴酚蓝

配方：

10%(W/V)AP

10%(W/V)AP

配制量：

配制方法：

50ml

称取5g过硫酸铵置于烧杯中

加入ddH2O定容至50ml

分装于1.5ml离心管中

-20℃

10%(W/V)

过硫酸铵

配方：

29.0

29.0%(W/V)Acr

1.0%(W/V)Bis

配制量：

配制方法：

1L

称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中

再称取10g甲叉双丙烯酰胺

加入约500mlddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L

用0.45um滤纸过滤除杂

转移棕色瓶中，4℃

注意：丙烯酰胺有毒，需小心操作，专用容器配制

30%(W/V)

丙烯酰胺储液

(DNA用)

配方：

1.??0.5M?EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na2·2H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后定容至1L。高压灭菌。

2.?5X?TBE:Tris碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5MEDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1XTBE:5X?TBE缓冲液与蒸馏水按1:4稀释就OK。

配置方法方法1：1%的溴酚蓝

将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。

方法2：0.05%的溴酚蓝

配westernblot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：

0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。

方法3：1％溴酚蓝

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。

相关词条

甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠

Western上样缓冲液配制整理

6×SDS样品缓冲液

4×Tris·Cl/SDS,PH6.8

(0.28mol/L)

7ml

甘油[30%(V/V)]

3.0ml（3.8g）

甘油密度为1.2613g/cm3(20/4℃)

SDS[1%

1g

溴酚蓝[0.0012%(m/V)]

1.2mg

DTT(0.5mol/L)

0.93g

如果需要，加去离子蒸馏水至10ml；等量分装成0.5ml并于-70℃贮存

8×Tris·Cl/SDS,PH6.8

Tris-base（0.5mol/L）

6.05g

40ml水中溶解后以1mol/L盐酸调至PH6.8，补加至100ml。

HCl

调至6.8

0.45um滤膜过滤，再加0.4gSDS

SDS[0.4%(m/V)]

0.4g

4℃可保存1

●丽春红S染色液

丽春红S

0.2%

SDSLoadingbuffer

2×

10ml

4×

10ml

Tris-HCl

PH=6.8

0.125M

1.25ml（1mol/L）

0.25M

2.5ml(1mol/L)

SDS

4%

0.4g或者

(10%SDS4ml)

8%

0.8g

2-ME2

5%

10%

DTT3

0.15M

1.5ml（1mol/L）

0.3M

3ml（1mol/L）

Glycerol

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