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数字PCR在EB病毒核酸检测中的临床价值

【摘要】目的评估EB病毒(EBV)多拷贝和单拷贝基因的数字PCR(dPCR)核

酸检测方法在EBV核酸定量检测中的性能，并探讨其在临床应用中的适用性。方

法对多拷贝BamHI-W基因及单拷贝EBNA1基因dPCR体系的灵敏度、特异性、

精密度、检测下限(LoD)和线性进行性能验证比对，采用最小二乘线性回归分

析评估其线性。同时，收集2022年1—7月就诊于南方医科大学南方医院疑似E

BV感染相关疾病患者的浆样本182例，使用dPCR和实时荧光定量PCR(qPCR)

同步检测EBVDNA载量，采用最小二乘线性回归分析评估其定量相关性。结果多

拷贝和单拷贝基因的dPCR体系均有良好的线性相关(R2分别为0.992、0.997,

P均〈0.001),BamHI-W基因dPCR体系LoD为188IU/mlEBNA1基因dPCR体系

LoD为358IU/ml；BamHI-W基因dPCR体系和EBNA1基因dPCR体系中高浓度样

本(1000000IU/ml)对数变异系数(CV)值分别为0.34%和0.21%,中低浓度样

本(5000IU/ml)对数CV值分别为0.98%和0.64%；7种常见临床感染病原体和E

B病毒阳性样本对照检测中，dPCR检测体系中只有EBV阳性样本产生阳性信号，

与其他病原体无交叉反应。在182份样本检测中，BamHI-W基因dPCR阳性率为

47.80%(87/182),EBNA1基因dPCR阳性率为35.16%(64/182),qPCR阳性率

为43.41%(79/182)。定量相关性分析中，BamHI-W基因dPCR体系和EBNA1

基因dPCR体系与qPCR检测浓度值线性拟合R2值分别为0.837和0.763(P均＜

0.001)。临床样本中的BamHI-W基因的拷贝数为3〜18拷贝，不同患者感染的

EBV的BamHI-W基因拷贝数不同。对于每例患者，多拷贝BamHI-W基因dPCR

体系和单拷贝EBNA1基因dPCR体系检测的载量监测变化曲线趋势具有较高的一

致性。结论基于dPCR技术的检测多拷贝BamHI-W基因和单拷贝EBNA1基因的

EBV检测方法均具有较高的灵敏度和特异性，精密度和定量准确性均适用于临床

样本检测。多拷贝BamHI-W基因dPCR方法在提高检测灵敏度方面具有较大的优

势，可作为目前EBVDNA载量检测方法的补充，特别是在低浓度样本中；同一患

者的EBVDNA检出和动态监测使用多拷贝基因效果更好，不同患者比较EBV载量

需要用单拷贝基因或以同一标准品标化后比较。

【关键词】爱泼斯坦巴尔病毒感染；数字聚合酶链反应；多拷贝基因；

单拷贝基因；核酸检测

EB病毒(EBvirusEBV)是一种普遍感染人类的线性双链DNA病毒，成

人感染率高达90%,其与多种儿科感染性疾病、非肿瘤性重症以及恶性肿瘤密切

相关［1-3］oEBV感染通常涉及多器官，其临床表现多样且复杂，常常导致漏

诊或误诊，给临床诊断带来了挑战［4］。浆EBVDNA定量检测对预测EBV相关

恶性疾病的诊断、治疗和预后具有重要价值［5-7］。研究证实，鼻咽癌和淋巴

瘤患者浆中的EBVDNA分子主要是“裸露的DNA片段，且这些EBVDNA片段相

对较短，其中87%的片段短于181bp［8］o相关研究也表明，浆EBVDNA的大

小和数量在鼻咽癌和非鼻咽癌人群中存在差异，利用此差异进行不同大小的EBV

DNA片段分析建立鼻咽癌筛查策略在减少假阳性方面表现出更好的性能，基于

浆中病毒核酸碎片模式的研究具有更大的价值［9］。目前，应用实时荧光定量

聚合酶链反应(quantitativepolymerasechainreactionqPCR)方法进行

EBVDNA载量检测已被国内外广泛应用，不同试剂盒检测不同的EBV基因，包括

多拷贝BamHI-W基因和单拷贝EBNA1基因、EBER1基因等。采用针对不同基因

的EBV核酸载量检测方法，得到的EBV拷贝数可能存在很大差别［310］o多

拷贝BamHI-W基因在EBV基因组中有多个重复，多篇文献报道以其作为扩增靶

基因能够提高检测的灵敏度［11-13