通用版2025届高考生物二轮复习专题9考点4基因工程讲义.docxVIP

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考点四基因工程

1．基因工程的理论基础

2．基因工程的3种基本工具

3．熟记基因工程的四个操作步骤

(1)目的基因的筛选与获得途径

(2)基因表达载体(重组质粒)的构建

(3)将目的基因导入受体细胞

(4)目的基因的检测与鉴定

4．图解记忆蛋白质工程

5．PCR技术原理与条件

6．PCR技术的过程

7．DNA的粗提取与鉴定

8．DNA片段的扩增及电泳鉴定

1．(2024·山东，25)水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻，实现了对直链淀粉合成酶基因(Wx基因)启动子序列的定点编辑，从而获得了3个突变品系。

(1)将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时，所需的酶是__________________________________________________________________________，重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为________。

(2)依据启动子的作用推想，Wx基因启动子序列的变更影响了_________________________，

从而变更了Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比，3个突变品系中Wx基因限制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列__________(填“发生”或“不发生”)变更，缘由是_____________________________________________________________________________。

(3)为检测启动子变更对Wx基因表达的影响，科研人员须要检测Wx基因转录产生的mRNA(WxmRNA)的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA，经____________过程获得总cDNA。通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出Wx基因的cDNA，缘由是_________

_______________________________________________________________________________。

(4)各品系WxmRNA量的检测结果如图所示，据图推想糯性最强的品系为________，缘由是______________________________________________________________________________。

答案(1)限制性内切核酸酶和DNA连接酶转化

(2)RNA聚合酶与启动子的识别和结合不发生编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含启动子

(3)逆转录(或反转录)引物是依据Wx基因的一段已知序列设计合成的(或引物能与Wx基因的cDNA特异性结合)

(4)品系3品系3的WxmRNA量最少，限制合成的直链淀粉合成酶的量最少，直链淀粉合成量最少，糯性最强

解析(1)构建基因表达载体须要限制性内切核酸酶和DNA连接酶，可以对目的基因和载体进行切割和连接，重组载体进入受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。(2)RNA聚合酶与启动子识别和结合后启动转录，启动子的序列变更会影响与RNA聚合酶的识别和结合，从而变更基因的转录，3个突变品系中变更的是启动子的序列，影响mRNA的转录，而编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含有启动子的序列，所以编码合成的直链淀粉酶的氨基酸序列不发生变更。(3)通过mRNA获得cDNA是逆转录(或反转录)过程。PCR过程中须要模板、原料、酶、引物等，其中引物是依据已知基因上的一段序列合成的，这样要从总cDNA中专一性的扩增出Wx基因的cDNA，关键是要依据Wx基因的一段已知序列合成出相应的引物。(4)据题中信息可知，水稻胚乳中直链淀粉所占比例越小，糯性越强，题图中品系3中的WxmRNA量最少，这样合成的直链淀粉合成酶的量最少，则合成的直链淀粉所占比例最小，糯性最强。

2．(2024·山东，25)人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过变更该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A蛋白结合位点的详细位置。相关信息如图所示。

(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是__________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是____________。本试验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共须要________种酶。

(2)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，胜利转