抗肝损伤和肝纤维化药实验法.pptxVIP

抗肝损伤和肝纤维化药实验法;肝脏是人体最大腺体，位于腹腔右上方。分左叶、右叶、方叶及尾状叶四个叶。

肝脏功效

代谢功效(合成各种蛋白质和脂类)

胆汁分泌（有助脂肪消化和吸收)）

解毒功效

防御功效

参加凝血及抗凝血

造血功效（胚胎时期);肝脏细胞:实质细胞(肝细胞)及非实质细胞(肝星状细胞\枯否细胞\pit细胞\窦内皮细胞)

Pit细胞－大颗粒淋巴细胞-位于肝血窦内Nk细胞。

;第1节急性肝损伤动物模型

作用：筛选改进肝细胞损伤药品并评价其活性

主要内容：

1.四氯化碳肝损伤动物模型

2.急性氨基半乳糖肝损伤动物模型

3.急性对乙酰氨基酚肝损伤动物模型

4.急性乙醇性肝损伤动物模型

5.大鼠肝缺血-再灌注模型;1.四氯化碳肝损伤动物模型

【原理】

1)CCL4对肝细胞膜直接溶解作用。

2)活性代谢产物对肝细胞损伤。CCL4在肝细胞内质网中经细胞色素P450酶代谢，生成活泼三氯甲基和氯自由基。

①与细胞内和细胞膜大分子发生共价结合，膜脂质过氧化，膜结构和功效完整性被破坏；

②抑制细胞膜及线粒体膜上钙泵活性,胞浆[Ca2+]升高，Ca2+-ATP酶激活,ATP耗竭造成肝细胞损伤坏死。;动物：以大鼠使用最多，雌雄兼用，280g左右。

方法：

大鼠普通以CCL4原液1ml／kg体重一次性ip或sc注射。也可经ig给药，0.8-1.6ml／kg，配成1:1～1:3橄榄油或精制花生油稀释后ig。

小鼠对CCL4亦较敏感，配成1％橄榄油或精制花生油稀释液，按10-20ml／kgig或ip注射。

观察指标：

1.给CCL4后16-24h处死动物，测定血清ALT和AST（↑）改变，甘油三酯(GT↑)、乳酸脱氢酶(LDH↑)、总胆酸(TBARS↑)及肝指数升高,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px↓)（检测试剂盒）。

2.肝病理形态学检验。;【注意事项和评价】

(1)此模型是一个经典试验性肝损伤模型。形态学上主要表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性，转氨酶ALT和AST升高，并能灵敏地反应肝损伤程度。ALT和AST16-24h后到达高峰，升高十倍左右，90h后可恢复到正常范围。

（2）可先给药品7-10天，以评价药品对肝损伤保护。

(3)CCL4可由呼吸道、皮肤吸收，对人体有一定毒性，注意个人防???。;;2.急性氨基半乳糖肝损伤动物模型

【基础原理】氨基半乳糖(Galactoamine，GalN)，常见其盐酸盐，生理盐水溶解。

机制：GalN属间接肝毒剂，肝损伤与其在肝内代谢及随即对核酸合成影响相关。GalN引发肝细胞坏死。分为三个步骤：第一步，GalN在肝内代谢引发VDP-葡萄糖胺聚积，同时引发尿嘧啶核苷酸和UTP（尿苷三磷酸）缺乏；第二步，这些代谢异常引发肝细胞膜损伤；第三步，钙离子内流增加破坏细胞内钙稳态，进而引发代谢紊乱，造成细胞死亡。;(1)动物：大鼠，250～350g，雌雄兼用。

(2)方法：将GalN以无菌生理盐水配成10％溶液，1mol/LNaOH调pH至7.0，ip一次性注射500-850mg／kg（大于1000mg／kg，引发广泛性肝坏死）。

(3)检测指标：给药16-24h处死动物，测定血清ALT（↑）和AST（↑），GT(↑)、LDH(↑)、TBARS(↑)及肝指数(↑)。

肝病理形态学检验。;【评价】

(1)小鼠不敏感。

(2)GalN与CCl4所致肝损伤组织学改变显然不一样。GalN损伤则呈弥漫性多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4显著，嗜酸性小体较多见，与病毒性肝炎所造成损伤类似。GalN肝毒性专一性较佳，对人安全无毒。

GalN肝损伤模型是研究病毒性肝炎发病机制及其药品治疗很好模型。;3急性对乙酰氨基酚肝损伤动物模型

【基础原理】

1.大剂量对乙酰氨基酚代谢中产生大量N-乙酰-对苯醌亚胺(NAPQI)，超出了GSH解毒能力，未被去除NAPQI与生物大分子共价结合，造成蛋白质巯基被氧化和芳基化而影响功效。

2.对乙酰氨基酚在肝内代谢过程中产生自由基可引发肝细胞膜脂质过氧化，并经过破坏钙稳态而产生细胞毒性。;【操作步骤】

(1)动物：昆明小鼠，雄性，25～35g。

(2)方法：将对乙酰氨基酚溶于40％无菌生理盐水，一次性ip注射300-500mg/kg，24h后取血。

(3)观察指标：

血清ALT和AST测定。

肝作组织学检验。;【评价】

(1)对乙酰氨基酚（扑热息痛），乙酰氨基酚肝损伤是研究药品性肝损伤常见动物模型。

(2)对乙酰氨基酚肝损伤组织学改变主要表现