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试验7用生长谱法测定微生物营养要求

实验用生长谱法测定微生物的营养专家讲座

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一、试验目标

学习并掌握用生长谱法测定微生物营养基本原理和方法。

二、试验内容

用生长谱测定大肠杆菌和枯草杆菌所需要碳源。

三、试验原理

为了使微生物生长繁殖，必须供给所需碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等，假如缺乏其中一个该微生物便不能生长。依据这一特征，可将微生物接种在一个只缺乏其中一些营养物完全适合琼脂培养基中，倒成平板，再将所缺这种营养物（如各种碳源）点植于平板上，经适温培养该营养物便逐步扩散于植点周围。该微生物若可利用或需要此种营养物，便在这种营养物扩散处生长繁殖，微生物繁殖之处便出现圆形菌落圈，即生长图形，故此法为生长谱法。这种方法能够定性，定量地测定微生物对各种营

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养物质（如碳源、氮源维生素）需要，字微生物育种和营养缺点型判定中也用此法。

四、试验仪器、材料和用具

一)试验仪器

37℃恒温培养箱、1000ul取液器

二)微生物材料

大肠杆菌及枯草杆菌斜面。

三)培养基

合成培养基（详细配方见附录4.16）

加12ml0.04%溴甲酚紫（PH5.2-PH6.8，颜色由黄色变紫色，作为指示剂）0.1Mpa灭菌20min。

四)试剂

分别放有小滤纸片10%木糖，葡萄糖，半乳糖，麦芽糖，蔗糖，乳糖无菌溶液，无菌生理盐水。

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五)试验用具

无菌平板，无菌镊子，无菌试管，无菌1000ul吸头，酒精灯。

五、试验步骤

将大肠杆菌斜面和枯草杆菌斜面用无菌生理盐水洗下，制成菌悬液。

将合成培养基约20ml,熔化后冷却到50℃左右加入1000ul大肠杆菌悬液，摇匀，马上倾注于直径为90mm无菌培养皿中，待冷却凝固后，在平板后面用记号笔划分六个区，并标明关键点植各种糖类，

用无菌镊子，分别夹取6种糖中滤纸片对号点植。（注意预防交叉糖份污染）

倒置于37℃温箱培养18-24h，观察各种滤纸片周围有没有菌落圈。

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六结果与讨论

绘图表示生长情况。

依据试验结果，大肠杆菌和枯草杆菌所能利用碳源各是什么？

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