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盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜枯萎病菌中的应用的制作
方法
专利名称:盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜枯萎病菌中的应
用的制作方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,特别是涉及生防内生放线菌一
盐屋链霉菌(Stretomycessioyaensis)的培养及其代谢产物
的应用。
背景技术
植物体内都存在大量的内生菌,内生菌最早发现于牧草,后
来又在木本植物、草本植物、禾本植物、苔藓、地衣、海藻
等植物中被发现。迄今的研究表明,植物内生菌可增强宿主
的抗病性、提高植物的生产力、抗逆抗虫等。发挥这些作用
是由于内生菌在植物体内繁殖和生长,并在体内产生有生物
活性的次生代谢产物。因此,内生菌可能成为生物防治中有
潜力的生物控制剂,在生态农业和生物农药研制方面具有重
要的用途。近年来植物内生菌已引起了微生物学家、生态学
家、植物保护学家的广泛兴趣,逐渐成为国内外研究的热点。
目前微生物源农药的研究和开发在我国十分活跃,但微生物
资源及其应用潜力尚没有得到充分的发挥,而植物内生菌即
是这样一类有待开发的新兴微生物资源。目前对植物病害的
防治,主要采用化学农药杀灭病原菌,但化学农药对人畜的
毒副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用内生菌产
生的抗病原真菌的活性物质进行植物病原真菌病害的生物
防治,则具有周期短、易于研究、便于生产和低毒等优点。
本发明从枸骨中分离到一株生防内生放线菌,并对该菌株发
酵代谢产物进行了抑菌作用研究。该发明为微生物源农药的
进一步研制和开发提供优良的出发菌株。
发明内容
本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物源农药种类
较少的不足,提供一株
从枸骨中分离筛选出的内生放线菌-盐屋链霉菌
(Streptomycessioyaensis);本发明
的另一目的是提供利用该菌株代谢产物防治植物真菌病害
的方法。本发明盐屋链霉菌的分离、筛选与鉴定:是于2012
年7月在浙江杭州采集的枸骨茎中,经分离、纯化、培养、
发酵和活性测定等步骤获得并保存;经微生物分类学鉴定为
盐屋链霉菌(Streptomycessioyaensis),定名为盐屋链霉菌
107。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生
物中心保藏,保藏日期2012年12月12日,保藏登记号CGMCC
N0.6984。盐屋链霉菌107,显微形态特征:孢子丝直、螺旋
形,孢子长圆或椭圆形。本发明所述的盐屋链霉菌107,经
发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用
的代谢产物。本发明目的通过以下技术方案来实现:一种防
治水稻纹枯病、黄瓜立枯病、番茄灰霉病、黄瓜枯萎病或西
瓜枯萎病等植物真菌病害微生物代谢产物的制备方法,按以
下步骤进行:(I)菌种的活化培养:将分离保存的盐屋链霉菌
107菌种移至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)斜面平板上,在28°C
±1°C条件下培养至试管斜面长满孢子,供接种用;
(2)发酵培养:发酵培养液为每IOOOmL中含有黄豆饼粉20g,
玉米粉15g,麸皮10g,蛋白胨5g,(NH4)2SO45g,CaCO3
5g,MgSO410g,每300mL三角瓶装发酵培养液60mL;配制后
121°C灭菌20min,待冷却至40°C在无菌条件下挑取一钼
金环盐屋链霉菌107孢子接种,在28°C土1°C条件下,
摇床转速180转/分钟,发酵培养128h;(3)发酵物提取:发
酵完毕,离心收集发酵上清液,用常规有机溶剂萃取经真空
浓缩后获得浸膏,用于抑菌活性测定。本发明的有益效果:
一是本发明从植物枸骨茎中分离筛选出代谢物对部分植物
真菌病害病原菌具有较强抑制作用的盐屋链霉菌107,这为
农业上防治植物真菌病害病原菌提供了一株微生物菌株;二
是本发明提供了利用盐屋链霉菌107发酵获得活性代谢产物
的方法;该代谢产物可应用于植物真菌病害的防治,为农用
杀菌剂的开发增添了新的途径。
具体实施例方式实施例1:(盐屋链霉菌107的分离与筛选)本
发明于2012年7月在浙江杭州采集枸骨茎,经表面消毒、
内生菌分离、培养、发酵、活性测定以及对抑制植物真菌病
害病原菌活性菌株的筛选等步骤,从中获得盐屋链霉菌107,
保存。盐屋链霉菌107抑菌活性测定:取经0.22μm膜过滤
的发酵上清液ImL于无菌培养皿内,与9mL冷却至50°C的
PDA培养基迅速混匀,冷却后在每个培养基
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