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盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜枯萎病菌中的应用的制作

方法

专利名称：盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜枯萎病菌中的应

用的制作方法

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及生防内生放线菌一

盐屋链霉菌(Stretomycessioyaensis)的培养及其代谢产物

的应用。

背景技术

植物体内都存在大量的内生菌，内生菌最早发现于牧草，后

来又在木本植物、草本植物、禾本植物、苔藓、地衣、海藻

等植物中被发现。迄今的研究表明，植物内生菌可增强宿主

的抗病性、提高植物的生产力、抗逆抗虫等。发挥这些作用

是由于内生菌在植物体内繁殖和生长，并在体内产生有生物

活性的次生代谢产物。因此，内生菌可能成为生物防治中有

潜力的生物控制剂，在生态农业和生物农药研制方面具有重

要的用途。近年来植物内生菌已引起了微生物学家、生态学

家、植物保护学家的广泛兴趣，逐渐成为国内外研究的热点。

目前微生物源农药的研究和开发在我国十分活跃，但微生物

资源及其应用潜力尚没有得到充分的发挥，而植物内生菌即

是这样一类有待开发的新兴微生物资源。目前对植物病害的

防治，主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学农药对人畜的

毒副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用内生菌产

生的抗病原真菌的活性物质进行植物病原真菌病害的生物

防治，则具有周期短、易于研究、便于生产和低毒等优点。

本发明从枸骨中分离到一株生防内生放线菌，并对该菌株发

酵代谢产物进行了抑菌作用研究。该发明为微生物源农药的

进一步研制和开发提供优良的出发菌株。

发明内容

本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物源农药种类

较少的不足，提供一株

从枸骨中分离筛选出的内生放线菌-盐屋链霉菌

(Streptomycessioyaensis);本发明

的另一目的是提供利用该菌株代谢产物防治植物真菌病害

的方法。本发明盐屋链霉菌的分离、筛选与鉴定:是于2012

年7月在浙江杭州采集的枸骨茎中，经分离、纯化、培养、

发酵和活性测定等步骤获得并保存；经微生物分类学鉴定为

盐屋链霉菌(Streptomycessioyaensis),定名为盐屋链霉菌

107。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生

物中心保藏，保藏日期2012年12月12日，保藏登记号CGMCC

N0.6984。盐屋链霉菌107，显微形态特征:孢子丝直、螺旋

形，孢子长圆或椭圆形。本发明所述的盐屋链霉菌107，经

发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用

的代谢产物。本发明目的通过以下技术方案来实现:一种防

治水稻纹枯病、黄瓜立枯病、番茄灰霉病、黄瓜枯萎病或西

瓜枯萎病等植物真菌病害微生物代谢产物的制备方法，按以

下步骤进行:(I)菌种的活化培养:将分离保存的盐屋链霉菌

107菌种移至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)斜面平板上，在28°C

±1°C条件下培养至试管斜面长满孢子，供接种用；

(2)发酵培养:发酵培养液为每IOOOmL中含有黄豆饼粉20g，

玉米粉15g，麸皮10g，蛋白胨5g，(NH4)2SO45g,CaCO3

5g,MgSO410g，每300mL三角瓶装发酵培养液60mL;配制后

121°C灭菌20min，待冷却至40°C在无菌条件下挑取一钼

金环盐屋链霉菌107孢子接种，在28°C土1°C条件下，

摇床转速180转/分钟，发酵培养128h；(3)发酵物提取:发

酵完毕，离心收集发酵上清液，用常规有机溶剂萃取经真空

浓缩后获得浸膏，用于抑菌活性测定。本发明的有益效果:

一是本发明从植物枸骨茎中分离筛选出代谢物对部分植物

真菌病害病原菌具有较强抑制作用的盐屋链霉菌107，这为

农业上防治植物真菌病害病原菌提供了一株微生物菌株；二

是本发明提供了利用盐屋链霉菌107发酵获得活性代谢产物

的方法；该代谢产物可应用于植物真菌病害的防治，为农用

杀菌剂的开发增添了新的途径。

具体实施例方式实施例1:(盐屋链霉菌107的分离与筛选)本

发明于2012年7月在浙江杭州采集枸骨茎，经表面消毒、

内生菌分离、培养、发酵、活性测定以及对抑制植物真菌病

害病原菌活性菌株的筛选等步骤，从中获得盐屋链霉菌107，

保存。盐屋链霉菌107抑菌活性测定:取经0.22μm膜过滤

的发酵上清液ImL于无菌培养皿内，与9mL冷却至50°C的

PDA培养基迅速混匀，冷却后在每个培养基