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高效液相色谱仪利用中常见故障及解决方式

1高效液相色谱仪系统

液相色谱仪要紧由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处置系统组成。关于整个系统而言，柱子、

泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的要紧部位。

2常见问题及解决方式

高效液相作为一种高周密仪器，若是在利用进程中不依照正确操作的话，就容易致使一些问题。其中最多见的确

实是柱压问题、漂移问题、峰型异样问题。

柱压问题柱压问题是利用高效液相色谱进程中需要紧密注意的地址，柱压的稳固与色谱图峰形的好坏、柱效、分离

成效及保留时刻等紧密相关。所谓柱压稳固并非是指压力值稳固于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（Bar）

之间（在利用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的转变是许诺的）。压力太高、太低都属于柱压问题。

2.1.1压力太高这是高效液相在利用中最多见的问题，指的是压力突然升高，一样都是由于流路中有堵塞的缘故。现

在，咱们应该分段进行检查。

(1).第一断开真空泵的入口处，现在PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是不是自由淌下，若是液体

不滴或缓慢淌下，那么是溶剂过滤头堵塞。处置方式：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。若是液体

自由淌下，溶剂过滤头正常，在检查；

(2).打开Purge阀，使流动相不通过柱子，若是压力没有明显下降，那么是过滤白头堵塞。处置方式：将过滤白头掏

出，用10%的异丙醇超声半个小时。若是压力降至100PSIBar)以下，过滤白头正常，在检查；

(3).把色谱柱出口端取下，若是压力不下降，那么是柱子堵塞。处置方式：若是是缓冲盐堵塞，那么用95%的水冲至

压力正常。若是是一些强保留的物质致使堵塞，那么要用比此刻流动相更强的流动相冲至压力正常。假设按上面的方

式长时刻冲洗压力都不下降，那么可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，若是柱压仍

不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，因此尽可能少用。

2.1.1压力太低压力太低的现象一样是由于系统泄漏，处置方式：寻觅各个接口处，专门是色谱柱两头的接口，把泄

漏的地址旋紧即可。固然还有一个缘故确实是泵里进了空气，但现在表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严峻一点

会致使泵无法吸上液体。处置方式：打开Purge阀，用3-5ml/min的流速冲洗，若是不行，那么要用专用针筒在排空

阀处借住外力将气泡吸出。

．漂移问题要紧包括基线漂移和保留时刻漂移。

2.2.1基线漂移一样说来，机械刚起动时，基线容易漂移，可能要半个小时的平稳时刻，若是你用了缓冲溶

液或缓冲盐，还有确实是在低波长下（220nm）平稳时刻相对会比较长，但如果是你在实验进程中发觉基线漂移，那么

你要考虑下面的缘故：

一、柱温波动。解决方式：操纵好柱子和流动相的温度，检查是不是有打开的窗户或空调对着柱温箱。

二、流通池被污染或有气体。解决方式：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，能够用

1N的硝酸（不要用盐酸）。

3、紫外灯能量不足。解决方式：改换新的紫外灯

4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。解决方式：检查流动相的组成，利用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

五、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个慢慢升高的基线。解决方式：利用爱

惜柱，如有必要，在进样之间。在分析进程中，按期用强溶剂冲洗柱子。

六、检测器没有设定在最大吸收波优势。解决方式：将波长调整至最大吸收波优势

7、流动相的PH值没有调剂好。解决方式：加适量的酸或碱调至最正确PH值

2.2.2保留时刻漂移保留时刻重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时刻相差不要

超过15s，超过了半分钟可看做保留时刻漂移，就无法进行定性，你要考虑以下缘故：

一、温控不妥。解决方式：调好柱温，检查是不是有打开的窗户或空调对着柱温箱。

二、流动相较例转变。解决方式：检查四元泵的比例阀是不是有故障

3、色谱柱没有平稳。解决方式：在每一次运行之前给予足够的时刻平稳色谱柱

4、流速转变。解决方式：从头设定流速

五、泵中有气泡。解决方式：、从泵中除去气泡

峰型异样问题峰型问题是液相的要紧问题，在做液相进程中，咱们确实是要变换不同的条件来改善不行的峰型，

关于各类各样的异样峰，要区别对待，从要紧问题动身，一个一个加以解决。

一、色谱图中未出峰。解决方式：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相利用不正确；