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PRRSVGDQYI株的体外传代变异及全长cDNA克隆载体的构建的开题报告

本文计划研究PRRSVGDQYI株的体外传代变异及全长cDNA克隆载体的构建。具体目的如下：

1.通过体外传代将PRRSVGDQYI株在细胞培养基中连续传代，观察其基因序列变异情况并筛选出变异较大的株系。

2.从筛选出的变异较大的株系中提取RNA，借助RT-PCR扩增获得其全长cDNA序列。

3.将全长cDNA序列克隆到载体中，构建PRRSVGDQYI株的全长cDNA克隆载体，以期在研究中更好地应用。

研究方法如下：

1.筛选出变异较大的PRRSVGDQYI株系，并进行体外传代操作。选取其中的样本进行RNA提取，借助RT-PCR扩增，得到全长cDNA序列。

2.构建全长cDNA克隆载体，选用TA克隆方法将全长cDNA序列插入到载体中。使用DNA测序确认克隆载体中的序列与之前扩增的序列一致。

3.对PRRSVGDQYI株全长cDNA克隆载体进行验证。使用现有的病毒感染模型，感染细胞并观察感染情况。检测感染后的病毒RNA和蛋白的表达情况，以确认PRRSVGDQYI株全长cDNA克隆载体的可行性。

预期成果：

1.筛选出变异较大的PRRSVGDQYI株系，为后续研究提供基础。

2.构建PRRSVGDQYI株的全长cDNA克隆载体，使其在病毒学研究中更加便捷。

3.对全长cDNA克隆载体进行验证，得到PRRSVGDQYI株的感染情况和表达情况，为对该病毒的更深入研究提供基础。