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Virusgeneticengineering
病毒基因工程专家讲座
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病毒基因工程疫苗
病毒基因工程疫苗：基因缺失减毒活疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗、转基因植物可食疫苗、合成肽疫苗和抗独特征疫苗
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基因工程疫苗优点
生产成本降低
能够生产当前尚无敏感细胞病毒疫苗如：乙型肝炎病毒表面抗原疫苗
采取重组病毒系统如痘病毒（易于制备同一载体多价病毒疫苗）
能够完全去除病毒基因中含有潜在危害性部分（一些病毒致癌基因）
能够制备单一成份病毒疫苗，也可制备同一病毒多成份病毒疫苗
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抗病毒药品和制剂
很多抗病毒感染药品是一个生物药品（干扰素、转移因子、活性多肽等），生物药品有起源于病毒，有起源于病毒感染细胞时宿主反应产物，它们都是有对应细胞中产生，在组织细胞内含量极微，而基因工程能够大量生产多肽和蛋白质
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病毒载体
病毒载体优点
（1）病毒基因组结构简单，遗传背景比较清楚，易于改造和操作，适合于大规模商业应用
（2）病毒增殖速度快外源基因在很短时间就可大量积累
（3）病毒本身含有感染特定受体细胞能力，外源基因导入效率较高
（4）病毒含有特异宿主范围和组织嗜性，外源基因导入含有一定靶向性，对基因治疗有益
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（5）病毒种类繁多，且各具不一样特征，构建病毒载体也含有不一样特点，能够用于不一样类宿主基因转移与表示，以满足不一样需要，扩大基因工程适用范围
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病毒载体应用
高水平表示特定基因产物
真核细胞基因分子生物学研究
病毒载体可被用作基因递送系统
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病毒载体主要类型
一噬菌体载体
二杆状病毒载体
三动物病毒载体
四植物病毒载体
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入噬菌体
基因组结构：可分为左臂、中段和右臂三个部分。
左臂从A到J,长约20kb，其中基因编码构建头部、尾部、尾丝等组装完整噬菌体所需蛋白质。
中段长约20kb，是入噬菌体DNA整合和切出、溶原性生长所需序列。
右臂长8~10kb，是调控区，控制溶菌和溶原生长最主要基因调控序列以及入噬菌体DNA复制起始区。
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入噬菌体载体构建
利用入噬菌作载体，主要是将外源DNA替换或插入中段序列，使其随左臂和右臂一起包装成噬菌体，再去感染大肠杆菌，并随噬菌体溶菌繁殖而繁殖。
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M13噬菌体基因组结构
关键部分是一单链环状DNA分子，长6407个核苷酸，有10个基因组成，90%以上基因组序列编码蛋白质，除了在基因Ⅱ于基因Ⅳ以及基因Ⅲ与基因Ⅷ之间有较长基因间隔区（IR）外，其它基因之间间隔仅有几个核苷酸。
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M13噬菌体载体构建
利用M13基因组中一段507个核苷酸基因间隔序列（IS），该区可接收外源DNA插入而不影响M13噬菌体活力，经过常构建M13载体都是在RF-DNAIS区插入选择标识基因，然后在选择标识基因区内组装适当多克隆位点，方便于外源片段插入。
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M13丝状噬菌体载体特点
M13感染与释放不会杀死宿主菌，仅造成宿主细胞生长迟缓
M13DNA在宿主细胞中既能够是单链也能够是双链，经过感染或转化方法能将M13DNA导入宿主细胞中
M13包装不受DNA大小限制，噬菌体颗粒大小可随DNA大小而改变，即使DNA大小比本身DNA大小超出6倍，仍能进行包装
可用于制备大量纯化单链DNA分子
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二杆状病毒表示载体
A基本原理
目标基因插入转移载体。
目标基因转移到病毒基因组靶位点，空斑纯化取得重组病毒。
重组病毒感染宿主培养细胞或幼虫。
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杆状病毒表示载体构建
转移载体通常由三部分组成：
E.coli质粒复制原点和抗生素抗性基因（如Ampr），确保转移载体能在大肠杆菌中扩增。
含有一个杆状病毒高效表示基因开启子，在该开启子下插入要表示外源基因。
开启子上游和外源基因下游则分别含有一段杆状病毒DNA序列，用于与野生病毒DNA同源重组。
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杆状病毒表示系统优缺点
优点
对外源基因容量大
适合表示细胞毒性蛋白
安全性
表示产量高
后加工过程完全
能够同时表示多个外源基因
体内表示
缺点
瞬时表示
糖基化简单
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动物病毒载体分类
整合型载体
病毒载体整合入宿主细胞染色体，并随染色体复制而复制，可连续表示外源基因，但存在插入诱变危险，主要包含SV40载体和反转录病毒载体。
游离型载体
病毒载体不整合入宿主
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