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重组DNA基本步骤;重组DNA基本步骤;;取得目标基因路径;;;这么就能够用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段,对于原核生物比较小基因组来说,能够直接用标识地探针来获取在经过特定方法,对于比较大基因组,能够先制作基因文库,然后钓取所需要带有目标基因片段。
;限制性内切酶对DNA切割方式有两种,一个切割方式是完全酶切,另一个方式为部分酶切。
;;体外重组连接惯用方法
1黏性末端连接法
2平齐末端连接发;;平齐末端连接法:
用化学合成法、逆转录酶酶促合成法取得DNA片段或cDNA片段,以及一些限制酶酶切产生DNA片段,称为平齐末端。当然平齐末端可用T4DNA连接酶连接,所需底物浓度高,效率低。所以通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造方法是加人工接头或结尾;;这一过程分为两个步骤
1重组DNA引入宿主细胞
2重组体克隆筛选与判定;;;谢谢观看
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