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β-淀粉样多肽人源性单链抗体的表达、纯化及其抗体亲和力测定的开题报告

摘要：

β-淀粉样多肽（β-amyloidpeptide，Aβ）是阿尔茨海默病（Alzheimersdisease，AD）的主要致病因素之一。在AD患者大脑中，Aβ会形成寡聚体或纤维化物质，导致神经元的死亡和不可逆性损伤。因此，针对Aβ的治疗策略成为治疗AD的重要研究方向。单链抗体（single-chainantibody，scFv）是目前广泛用于治疗和诊断疾病的重要药物。本文旨在构建并表达一种针对Aβ的人源性scFv抗体，并对其进行纯化和抗体亲和力测定。

首先，使用Aβ为抗原，通过基因重组技术构建含有VL和VH链的scFv抗体基因。然后，将构建好的抗体基因插入表达载体中，转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行表达。接着，通过镍柱层析、凝胶过滤和离子交换层析等多步骤纯化scFv抗体。最后，利用表面等离子共振（surfaceplasmonresonance，SPR）技术测定纯化后的scFv抗体与Aβ的结合亲和力。

实验计划：

1.优选抗原：Aβ40、Aβ42。

2.构建scFv抗体基因：利用RT-PCR技术扩增人源性抗体基因库中的VL和VH链。

3.合成scFv抗体基因并插入表达载体：合成scFv抗体基因，插入表达载体并进行验证。

4.表达和纯化：转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行表达，进行多步骤纯化。

5.抗体亲和力测定：利用SPR技术测定纯化后的scFv抗体与Aβ的结合亲和力。

预期结果：

成功构建出针对Aβ的人源性scFv单链抗体，并通过镍柱层析、凝胶过滤和离子交换层析等多步骤纯化。最后，利用SPR技术测定纯化后的scFv单链抗体与Aβ的结合亲和力，获得抗体的亲和力参数。本实验为后续针对Aβ的治疗研究提供了基础性的数据和资料。