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解决转化连接产物屡屡失败的方法

有时候转化老是失败,得不到目的克隆,有些是因为设备不好或

经验不足，的感受态效率不高,有些是因为片段浓度态

低，有些是因为采用平末端连接加上连接酶质量不行。这里，描

述一个方案来解决这方面的问题，就是热激加SOC培养1小时

后，先不象普通方案那样涂布平板，而是转移到瓶子里，加入10

体积的LB培养基和相应抗生素继续培养，然后提取质粒再次转

化，涂布平板后按照普通方案继续实验。如果目的宿主是BL21

系列感受态效率低的菌株，第一次转化可以考虑用

DH5a,JM109,XL-Blue,Top10之类更容易得到高一些感受态效率

的菌株作为宿主；如果采用测酶活来筛选重组子而不是，因

为第一次转化提取的是混合质粒，第二次转的是表达宿主，就可

以筛选到PCR过程没发生突变或突变不影响活性的重组子了。

如果片段取代的载体片段带有片段没有的酶切位

点，在第二次转化前，先用相应的内切酶切割质粒，就可以提高

第二次转化的菌落中目标重组子的比例了。

如果直接转BL21系列宿主，方法类似，加LB稀释培养至

菌体浓度明显增加再涂布或划线，然后再按普通方法挑菌落筛选，

也是可以的。

新方案不用增加多少费用，多花点时间，虽然因此可以挑取

到相同转化细胞繁殖出来的菌落的机会增大了。但如果不是做文

库，其实更有利于获得目的重组子。