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实验室培养基与试剂制备的制备和杀菌

3.1试剂的配制

3.1.1无菌生理盐水的配制

用精确到0.01g的电子称称取8.5g微生物检测专用盐，

在lOOmL烧杯中用二次化水溶解后，转移到lOOOmL的无

色透明的容量瓶并用二次化水定容到lOOOmL备用。

3.1.2营养琼脂培养基的配制

称取35g营养琼脂培养基用二次化水在250mL的烧

杯中溶解后，转移到lOOOmL的无色透明的容量瓶并用二次

化水定容到lOOOmLo然后用250mL的锥形瓶分装备用。

3.2试剂的分装

3.2.1生理盐水的分装

将配置好的生理盐水用500mL的量筒按照每个锥形瓶

装225mL的量进行分装。分装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶,

并用牛皮纸将瓶口包扎好。

3.2.2营养琼脂的分装

将配置好的营养琼脂用500mL的锥形瓶装进行分装。分

装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

3.2.3孟加拉红琼脂的分装

将配置好的营养琼脂用500mL的锥形瓶装进行分装。分

装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

3.2.4乳糖胆盐肉汤的分装

将配置好的乳糖胆盐用10mL的量管分装在玻璃试管中,

试管规格为15*150mm,锥形瓶装进行分装。分装好用乳胶

锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

3.3培养基和试剂灭菌

3.3.1培养基通常应采用高压湿热灭菌法，121°C灭菌

15min,特殊培养基按使用者的特殊要求进行灭菌（如含糖培

养基,115°C灭菌20mino)

3.3.2部分培养基（如嗜盐琼脂培养基，胆硫乳培养基等）,

只能煮沸灭菌。

3.3.3对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过滤方

法进行过滤除菌。

3.3.4即用型试剂不需灭菌，应参见相关国际标准或供

应商使用说明，直接使用。

3.4试剂的杀菌

3.4.1生理盐水的杀菌

将分装完毕的生理盐水，放在杀菌釜内，摆放好。然后

关上杀菌釜，打开电源，升温到80笆时，打开放气阀进行

放气，带放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至12PC

开始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回

归零时，打开放气阀门进行放气。等待条菌釜内气压全部排

完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间的小

窗内。

3.4.2营养琼脂的杀菌

将分装完毕的营养琼脂，放在杀菌釜内，摆放好。然后

关上杀菌釜，打开电源，升温到80C时，打开放气阀进行放

气，带放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至121C

开始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回

归零时，打开放气阀门门进行放气。等待杀菌釜内气压全部

排完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间预

处理间的水浴锅，进行保温，水浴锅的温度46il°C.

3.5培养基的配制

3.5.1孟加拉红琼脂培养基的配制

称取36g营养琼脂用二次化水在250mL的烧杯中溶

解后，转移到lOOOmL的无色透明的容量瓶并用二次化水

定容到lOOOmLo然后用250mL的锥形瓶分装备用。

3.5.2乳糖胆盐肉汤的配制

称取36g营养琼脂用二次化水在250mL的烧杯中溶

解后，转移到lOOOmL的无色透明的容量瓶并用二次化水

定容到lOOOmLo然后用250mL的锥形瓶分装备用。

3.6培养基的杀菌

3.6.1孟加拉红琼脂的杀菌

将分装完毕的营养琼脂，放在杀菌釜内，摆放好。然后

关上杀菌釜，打开电源,升温到80C时，打开放气阀进行放气,

带放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至121C开

始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回归

零时，打开放气阀门进行放气。等待杀菌釜内气压全部排

完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间预处理

间的水浴锅，进行保温，水浴锅的温度46°Cil°Co

3.6.2乳糖胆盐肉汤的杀菌

将分装完毕的乳糖胆盐发酵管，放在杀菌釜内，摆放好。

然后关上杀菌金，打开电源，升温到80笆时，打开放气阀进

行放气，