酶的生产-_精选完整版.ppt

酶的生产SS;动植物细胞培养的特殊性：

1、细胞比微生物细胞大得多，体积大几千倍，

2、对剪切力敏感，动物细胞没有细胞壁更甚

3、生长速率比微生物低，生长倍增时间和发酵周期均更长，

4、对营养的要求较微生物复杂，动物细胞往往需要添加血清和其他营养成分;3、酶的发酵生产;第一节酶的生产菌种;;;二、产酶菌种的要求

〔1〕不是致病菌及产生有毒物质或其他生理活生物质的微生物，确保酶生产和应用的平安。

〔2〕能在廉价的底物上生长良好，繁殖快，产酶量高，有利于缩短生周期

〔3〕产酶性能稳定，菌株不易退化，不易受噬菌体侵袭。

〔4〕目标酶的产量要高，性能符合应用需要，产生的酶容易别离纯化，最好为胞外酶。

〔5〕除蛋白酶生产菌种外，其他产酶菌种的产蛋白酶活力应该很低，防止目标酶的水解。;三.产酶微生物的别离和筛选

1)样品的采集:从富含该酶作用底物的场所采集样品

2)富集培养:投其所好，取其所抗

3)别离获得微生物的纯培养〔pureculture〕。

4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。

5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。

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?-淀粉酶的筛选

;蛋白酶产生菌的获得方法;第二节酶的发酵技术;三、发酵方法

;第三节提高酶产量的方法;2、诱导和阻遏

诱导：

诱导物的参加后，酶才大量合成，

参与分解代谢的酶：淀粉酶、纤维素酶

阻遏：

末端代谢物阻遏：

反响阻遏，合成代谢中的关键酶

分解代谢物阻遏：

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1.酶合成的诱导

加进某种物质，使酶生物合成开始或加速进行。

酶合成诱导的现象：

分解利用乳糖的酶有：

-半乳糖苷酶；?-半乳糖苷透过酶；硫代半乳糖苷转乙酰酶。

实验：〔1〕大肠杆菌生长在葡萄糖培养基上时，细胞内无上述三种酶合成；

〔2〕大肠杆菌生长在乳糖培养基上时，细胞内有上述三种酶合成；

〔3〕说明菌体生物合成的经济原那么：需要时才合成。;调节基因;2.末端产物阻遏

由某代谢途径末端产物的过量累积引起的阻遏。

酶合成阻遏的现象：

实验：

〔1〕大肠杆菌生长在无机盐和??萄糖的培养基上时，检测到细胞内有色氨酸合成酶的存在；

〔2〕在上述培养基中参加色氨酸，检测发现细胞内色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。

〔3〕说明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，表达了菌体生长的经济原那么:不需要就不合成。;色氨酸操纵子——酶的阻遏

;酶的诱导和阻遏操纵子模型;3.分解代谢物阻遏;分解代谢物阻遏现象：

实验：细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长，优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，产生了两个对数生长期中间隔开一个生长延滞期的“二次生长现象〞(diauxie或biphasicgrowth〕。;分解代谢物阻遏;三、提高酶产量的策略

〔一〕菌种选育〔一劳永逸〕

1.诱变育种

(1)使诱导型变为组成型——选育组成型突变株

(2)使阻遏型变为去阻遏型

选育营养缺陷型突变株

解除反响阻遏

选育结构类似物抗性突变株

解除分解代谢物阻遏——选育抗分解代谢阻遏突变株

2.基因工程育种;二、提高酶产量的策略

〔一〕菌种选育〔一劳永逸〕

1.诱变育种

(1)使诱导型变为组成型——选育组成型突变株

(2)使阻遏型变为去阻遏型

选育营养缺陷型突变株

解除反响阻遏

选育结构类似物抗性突变株

解除分解代谢物阻遏——选育抗分解代谢阻遏突变株

2.基因工程育种;〔二〕.通过条件控制提高酶产量

〔1〕添加诱导物

选择适宜的诱导物及浓度:

诱导物：酶的作用底物

酶作用底物的前体

酶的反响产物

酶的底物类似物或底物修饰物等

IPTG/乳糖纤维素/纤维二糖诱导纤维素酶;〔2〕降低阻遏物浓度

防止使用过于丰富的培养基和易被利用的碳源，并设法阻止效应物的形成和浓度的增加。

流加和连续培养;〔3〕.其他

促进分泌：添加外表活性剂

离子型对细胞有毒害作用

外表活性剂Tween－80

非离子型TritonX－10