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注射用重组人白介素-2

ZhusheyongChongzuRenBaijiesu-2

RecombinantHumanInterleukin-2forInjection

本品系由高效表达人白细胞介素-2（简称人白介素-2）基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高

度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。

1基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的要求。

2制造

2.1工程菌菌种

2.1.1名称及来源

重组人白介素-2工程菌株系由带有人白介素-2基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。

2.1.2种子批的建立

应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。

2.1.3菌种检定

主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。

2.1.3.1划种LB琼脂平板

应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。

2.1.3.2染色镜检

应为典型的革兰阴性杆菌。

2.1.3.3对抗生素的抗性

应与原始菌种相符。

2.1.3.4电镜检查（工作种子批可免做）

应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。

2.1.3.5生化反应

应符合大肠杆菌生物学性状。

2.1.3.6人白介素-2表达量

在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。

2.1.3.7质粒检查

该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。

2.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）

目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。

2.2原液

2.2.1种子液制备

将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接

种用。

2.2.2发酵用培养基

采用适宜的不含任何抗生素的培养基。

2.2.3种子液接种及发酵培养

2.2.3.1在灭菌培养基中接种适量种子液。

2.2.3.2在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，

如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录ⅨG）。

2.2.4发酵液处理

用适宜的方法收集处理菌体。

2.2.5初步纯化

采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。

2.2.6高度纯化

经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为人白介素-2原

液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。

2.2.7原液检定

按3.1项进行。

2.3半成品

2.3.1配制与除菌

2.3.1.1稀释液配制

按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。

2.3.1.2稀释与除菌

将检定合格加稳定剂的人白介素-2原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即

为半成品，保存于2～8℃。

2.3.2半成品检定

按3.2项进行。

2.4成品

2.4.1分批

应符合“生物制品分批规程”规定。

2.4.2分装及冻干

应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。

2.4.3规格

应为经批准的规格。

2.4.4包装

应符合“生物制品包装规程”规定。

3检定

3.1原液检定

3.1.1生物学活性

依法测定（附录ⅩD）。

3.1.2蛋白质含量

依法测定（附录ⅥB第二法）。

3.1.3比活性

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为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于1.0×10IU。

3.1.4纯度

3.1.4.1电泳法

依法测定（附录ⅣC）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加

样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或5μg(银染法)。经扫描仪扫描，纯度应不低于

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