生物药物的分离纯化..pptVIP

7.氨基酸类药物的分离纯化方法氨基酸的生产方法:蛋白质水解法发酵法化学合成与酶促合成法蛋白质水解法:水解法有酸水解、碱水解和酶水解三种。用盐酸水解为常用方法，其优点是水解迅速、完全，产物全部是L-型氨基酸，缺点是色氨酸全部被破坏，丝氨酸等部分被破坏。碱水解法易产生消旋作用，较少应用。酶水解法水解不够完全。发酵法:发酵法主要是选育特异产生某种氨基酸的菌株，经过发酵后，从培养液中提纯氨基酸。化学合成与酶促合成法:化学合成法一般得到的是D/L-型氨基酸，需要对这些异构体拆分；酶促合成法也是酶工程在医药工业上应用的一个内容，优点是技术工艺简单，转化率高，副产物少和易提纯等。氨基酸的分离方法:沉淀法吸附法离子交换法沉淀法:根据形成沉淀的原理不同分为两种:一种是依据不同氨基酸在水中或其他溶剂中的溶解度差异进行沉淀分离。另一是用特殊试剂沉淀某种氨基酸，如用邻二甲苯-4-磺酸与亮氨酸形成不溶性盐沉淀，再用氨水分解，使亮氨酸游离出来。吸附法:这是利用吸附剂根据氨基酸吸附力的差异进行氨基酸分离的方法。苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的分离就是利用活性炭对其吸附的原理。第二讲生物药物的分离纯化主要讲授内容1.生物药物原料的选择、预处理与保存方法2.生物药物的提取3.蛋白质类药物的分离纯化方法4.核酸类药物的分离纯化方法5.糖类药物的分离纯化方法6.脂类药物的分离纯化方法7.氨基酸类药物的分离纯化方法1.1生物药物原料的选择生物药物生产原料的选择原则主要是:(1)有效成分含量高，原料新鲜；(2)原料来源丰富，易得，原料产地较近；(3)原料中杂质含量少；(4)原料成本低等。但是，同时具备这4种有利因素的原料不多，生产研究者可酌情选择，但第一条是最重要的。原料的选择还要注意如下事项:植物原料要注意植物生长的季节性，选择最佳采集时间；微生物原料要注意微生物生长的对数期长短；动物原料有的要注意动物的类别、年龄与性别。也应注意原料的采集地和批次。1.2原料的预处理与保存动物原料采集后要立即处理,去除结缔组织、脂肪组织等,并迅速冷冻贮存；植物原料确定后,要择时采集并就地除去没有用的部分,将有用部分保鲜处理；收集微生物原料时,要及时将菌体细胞与培养液分开,进行保鲜处理。原料的保存方法主要有:①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。2.生物药物的提取(1)生物组织与细胞的破碎(2)生物组织细胞破碎后立即进行提取生物组织与细胞的破碎生物药物大部分存在于生物组织或细胞中,要提高提取率,对生物组织与细胞的破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法有5种:A.磨切法,该法属于机械破碎方法,使用的设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。B.压力法,这类方法有加压与减压两种,常用的法兰西压釜使用效果良好。C.反复冻融法,该方法设备简便,活性保持好,但用时较长。D.超声波振荡破碎法,该方法破碎效果较好,但由于局部发热,对活性有损失。E.自溶法或酶解法,用得较少。生物组织活性物质的提取要在细胞破碎后立即进行。提取过程中（1）要根据活性物质的性质，选择提取试剂。提取试剂主要有:水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂(如氯仿、丙酮等)。（2）考虑提取溶剂的用量（料液比）及提取次数、提取时间。（3）注意提取的温度、pH、变性剂等因素。这样才可以保证活性物质提取充分而且不变性。3.蛋白质类药物的分离纯化方法蛋白质类药物主要包括蛋白质、多肽和酶类等药物。它们的分离纯化方法有:(1)沉淀法(2)按分子大小分离的方法(3)按分子所带电荷进行分离的方法(4)亲和层析法(1)沉淀法蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。该法的原理是使蛋白质胶体颗粒破坏,从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、与靶物质结合沉淀法(如抗体一抗原)等。(2)按分子大小分离的方法这类方法有超滤法和透析法(即膜分离方法)、凝胶层析法、超速离心法等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。(3)按分子所带电荷进行分离的方法氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点,在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0,当溶液pH为4.0时,分子则带有正电荷