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黑河学院物理化学系专业技能大赛：论文类

不同基因表达达载体的优缺点

理化系生物技术班孟凡顺

进入21世纪以来，基因工程的发展越来越快，也越来越完整，

作为新世纪生物科学前沿，基因工程的快速发展也大大的刺激了

人们对科学知识的向往，走进基因工程，我们发现在基因工程的

四大步骤，目的基因的获取，基因表达载体的构建，将基因表达

载体打入受体细胞以及目的基因的监测与鉴定，这其中最重要的

是也是最繁琐的莫过于第二步基因表达载体的构建，而在基因表

达载体的构建这一过程中，最重要的无疑就是目的基因导入受体

细胞，将目的基因导入受体细胞的关键就是运载体的选择，在这

里，我们要对运载体的种类进行介绍。

首先我们要知道什么东西可以作为运载体，作为运载体又有哪

些特征？

首先，作为运载体的物质它必须可以进行自我复制，这样才可

以在它与外源基因融合后，独立在宿主细胞中复制繁殖，其次有

至少一个在融合外源基因后仍未被破坏的遗传表型，这便于将载

体导入受体细胞后的识别与筛选，通常表现在为抗性与显色表型

反应等，再次，载体上至少有一个限制性核酸内切酶的单一识别

位点，这样方便了外源基因的插入，最后，要有适当的拷贝数，

理论上在一定范围内，拷贝数量越多，越利于载体的制备，所有

的基因工程中的表达载体都必须具有以上四个条件。

在这里，我介绍三种载体。

1质粒载体

质粒载体是基因工程中最常用的载体之一，它源于细菌，是一

种源于染色体外却可以自由复制的小型环状DNA，大小在

1~200Kb之间，质粒通常含有一些编码对细菌有利生存的基因

也含有抗生素的抗性基因，经科学家多年的努力，人们终于对一

些质粒的生物学特征有了一些了解，进行了比较详尽的研究，比

如F质粒那F基因或性质粒，R质粒即抗性因子和col质粒即大

肠杆菌因子。

其实，一个质粒就是一个复制子，复制子往往有宿主专一性，但

奇怪的是，人们也发现了可以在两种不同宿主内复制的复制子，

即可构建的穿梭载体，这种新型载体的发现，大大的推进了克隆

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技术的发展，因为这种载体可以运载基因，在两种不同的生物之

间穿梭，这大大得简化了克隆的步骤。

质粒分转移型与非转移型，也分高拷贝型和低拷贝型。

转移型质粒是指质粒有一个流动特性，他可以通过接合作用从一

个细胞转移到另一个细胞，而非转移型则不存在这样的特性，它

想要完成以上过程，就必须依靠部分特定基因的相互作用，和转

移型质粒的带动来完成。

在利用质粒载体来进行基因工程技术的操作时，先去天然质粒，

然后对其进行修饰改造，那先去掉不必要的DNA区域。除保留

质粒复制等必要部分外，尽量缩小质粒的相对分子质量，以提高

外源基因片段的装载量然后质粒中限制性核酸内切酶的切点越

多切割后形成的DNA片段也就越多，为外源基因的转移提供不

便，再次我们在筛选重组质粒时，必须保留标记基因，在众多的

标记基因中，最好的就是抗性基因，主要有四环素抗性基因，卡

那霉素抗性基因，氨卡青霉素抗性基因，另外组织化学显色法和

荧光法也同样是在基因检测时常用到的方法。再后质粒在安全性

方面也要进行改造。要求质粒重组后不可以随便转移，避免造成

基因污染，最后，因为启动子有强弱之分，所以我们需要对质粒

改造或增加基因表达载体的调控序列。

在选取完质粒后，我们同同一种限制性核酸内切酶对目的基因

和质粒切割，使他们的的粘性末端或平末端相同，然后在同DNA

连接酶对他们进行不准确对接，最后在对对接后的结果进行筛

。

选，只筛选出重组质粒并进行后续操作

2噬菌体载体

噬菌体是一种寄生细菌体内的一类病毒的总称，由遗传物质核酸

和蛋白质外壳组成，内部核酸一般是双链性DNA分子，当然也

有少量的其他形状的，如单链DNA等等，尾部结构多为20面

体。说到噬菌体载体，我们必须先了解噬菌体的生命周期，噬菌

体的生命周期分为溶酶体周期与溶源周期，因此噬菌体分为两

类，第一类是烈性噬