紫杉醇的分离与纯化.doc

摘要

目的：探索红豆杉中紫杉醇的提取纯化工艺。方法：将新鲜的红豆杉树皮枯燥后用甲醇浸泡，陶瓷膜进行固液别离，纳滤膜浓缩，再用大孔树脂HZ818层析，洗脱液浓缩结晶，再活性炭脱色后甲醇重结晶，再硅胶正向层析，洗脱液浓缩后正已烷结晶，再真空枯燥得成品。结论：按本方法从红豆杉中提取的紫杉醇纯度为97.5%，收率为十万分之八。

关键词红豆杉，紫杉醇，提取纯化，树脂，硅胶

目录

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一、紫杉醇目前的一些别离纯化方法。 5

〔一〕液相萃取。 5

〔二〕固相萃取法。 5

〔三〕树脂层析法。 5

〔四〕活性炭脱色。 5

〔五〕硅胶正向层析。 5

〔六〕结晶纯化。 5

〔七〕其他技术手段。 5

二、实验材料与仪器 6

〔一〕原料与试剂。 6

〔二〕分析。 6

三、工艺流程。 6

四、试验过程与结果。 7

〔一〕原料前处理。 7

〔二〕甲醇浸泡提取及固液别离。 7

〔三〕纳滤浓缩。 7

〔四〕大孔树脂HZ818层析。 7

〔五〕大孔洗脱液浓缩结晶。 8

〔六〕活性炭脱色再甲醇重结晶。 8

〔七〕硅胶正向层析。 8

〔八〕正已烷结晶。 9

〔九〕真空烘干。 10

五、结论 11

六、参考文献 11

引言

全世界60亿人口中，每年约新增800万癌症患者，600多万人死于癌症，几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。癌症严重地威胁着人类的生命和健康，因此寻找有效的抗癌药物成为研究的热点。早在1958年美国癌症协会就发起一项历时20余年、筛选35000多种植物物种提取物的方案。在方案实施过程中，1963年美国化学家瓦尼和沃尔首次从生长在美国西部大森林中称太平洋杉中别离到了紫杉醇的粗提物。并发现紫杉醇粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有很高活性。由于该活性成份含量极低，直到1971年，他们才同杜克〔Duke〕大学的化学教授姆克法尔合作，通过x-射线分析确定了该活性成份的化学结构——一种四环二萜化合物，并把它命名为紫杉醇。1992年12月紫杉醇被FDA批准上市，目前紫杉醇已成为世界公认的强活性广谱抗癌药物。然而由于这种天然化合物资源极其有限，严重的限制了其研究和应用的进度。同时锋利的供需矛盾也在医学、化学和植物组织培养领域中引起了一场非同寻常的广泛研究，以增加这种化合物的来源和寻找高效、低毒、来源丰富的紫杉醇类似物[1]。

红豆杉资源：紫杉又名红豆杉、赤柏松，为紫杉科紫杉属长绿针叶乔木，是世界珍稀濒危物种，国家一级保护植物。因其药用价值巨大，世界各国将其列为“国宝”，素有“植物黄金”之称，是提取紫杉醇的天然原料[2]。紫杉醇主要存在于红豆杉树皮和针叶中，大约为0.010%~0.020%。

紫杉醇是从红豆杉属植物中别离纯化得到的天然抗肿瘤药物，其化学名为5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉醇烷-11-烯-9-酮-4,10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13-[〔2R.3S〕-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯]

分子式：C47H51NO14;分子量：853.89理化性质：针状结晶〔甲醇一水〕，熔点：213℃-216℃〔分解〕，[α]20D-49°〔甲醇〕。可溶于甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷，三氯甲烷等有机溶剂，难溶于水〔在水中溶解度仅为0.006mg/ml〕，不溶于石油醚。与糖结合成苷后的水溶性大大提高，但在脂溶性溶剂中溶解性降低[3]

一、紫杉醇目前的一些别离纯化方法：

〔一〕、液相萃取

溶剂萃取法常用于紫杉醇的粗提阶段，通常先用甲醇、乙醇、甲醇：二氯甲烷(1∶1)浸提,除去溶剂后所得的浸膏用CH2Cl2-H2O或CHCl3-H2O萃取,这样的提取方法获得的浸膏含有较多的杂质[4]。杨宪等人在紫杉醇提取工艺的优化研究中对乙醇萃取进行了充分研究。[5]

〔二〕、固相萃取法

固相萃取法(SPE)作为一种新型萃取方法，具有节省时间、降低溶剂用量、提高选择性和收率的优点，主要被用来除去与紫杉醇极性相差较大的杂质。所用填料主要有硅胶、氧化铝和C18反相硅胶。陈振德[6]等以红豆杉科榧属植物(Torreya)的假种皮为原料，直接对乙醇提取物进行硅胶柱层析，降低了制备紫杉醇的本钱，扩大了其原料的来源，且保护了植物资源。而