一、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪操作规程.pdfVIP

一、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪操作规程

一.开机

1.开主机总电源至ON。

2.开主机正面有钥匙的开关至ON（顺时针）。

3.开计算机及显示器，启动FlexControl软件。

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4.等待源高真空达到3×10mbar，如达不到该数值，检查是否有漏气发生。

5.进入日常操作。

二.关机

1．将靶退出。

2．在FlexControl界面的Spectrometer关掉高压（按“OFF”）。

3．关闭所使用的软件，关闭计算机。

4．关主机正面有钥匙的开关至OFF（逆时针）。

5．关主机总电源至OFF。

三．日常操作

1．打开FlexControl进入仪器控制界面。

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2．确认真空度为10mbar或稍低。

3．通过界面Carrier▲或主机正面的LoadEJECT开关，将样品靶放入仪器，等

待约2分钟，调整好靶位。在此过程中不应操作软件或硬件，以确保仪器通讯畅

通。

4．根据测量目的选择测量方法

⑴分子量测定：根据分子量大小选择相应的线性测量方法和仪器校正方法。

(2)肽质量指纹谱测量：根据所需测量的肽谱范围选择相应的反射测量方法和仪

器校正方法。

⑶根据需要选择正离子或负离子测量方法和仪器校正方法。

⑷如果进行串联质谱分析,则选择LIFT方法。

5．选择适当的仪器参数

6．测量

⑴．手动测量

a．选择好待测样品的靶位及相应参数后，按Start开始测量。

b．根据图谱的质量按Add添加或按ClearSum删除图谱。

c．按SaveAs保存图谱。

注：在测量过程中可随时调整激光能量和靶位置以获得最佳信噪比和分辨率。

⑵．自动测量

a．按菜单AutoXecute，再按Select选择一个Sequence文件名。

b．按Edit编辑待测样品，用Sampleposition的Sample依次选定靶位后按Add

添加到EditAutoXecuteSequence中。

c．按AutoXecuteMethod选择Calibration或样品测量方法。

d．按Edit设定激光能量、靶位移动、累加方法等参数并保存该参数。

e．按StartAutomaticRun开始自动测量

7．处理图谱

（1）打开FlexAnalysis进入图谱处理界面。

（2）open菜单选择待处理的图谱。

（3）标峰：a）反射模式标单同位素峰；b）蛋白质线型测量模式时标平均峰。

（4）打印图谱。

四．注意事项

1．关机时氮气可不关，可将压力适当调低，以免仪器受潮。

2．手动测量过程中随时注意仪器的漂移，若有漂移需用标肽或标准蛋白校正仪

器。

3．要得到一张满意的图谱，必须调整合适的激光能量。

4．关机时应先关高压后再退出FlexControl。

5．须等待样品靶点完全干燥后才能将靶放入仪器，且不宜过夜。

二、胶内酶切方法

1．用1.5mm3切胶笔切下胶点，置于离心管中（Eppendorf管或PCR管）。

2．用50ul双蒸水洗2次，每次10分钟。

3．加考染胶色液（50mMNHHCO/CHCN(1:1)）50ul，超声脱色5分钟或37℃

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20分钟，吸干。（若为银染胶点，可以不脱色，也可以加15mMKFe(CN)/50mM

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NaSO轻摇至变为淡黄色透明，再用水反复洗至无色）。

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4．重复步骤３，至蓝色褪去。

5．加CHCN50ul脱水至胶粒变白，真空抽干10分钟。

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6．加10mMDTT（25mMNHHCO）20ul，56℃水浴1小时。

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7．冷至室温，吸干，快速加55mMIAA（