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对遗传学诊断的分析思考

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如意！

近二十年来，分子遗传学的一系列成就，不仅推

动了分子生物学和基础医学的发展，而且对遗传疾病

的诊断和治疗，也应用了分子遗传学的新技术如分子

杂交、内切酶、DNA重组等进行了探索，并获得了有

意义的结果。生物遗传的基本单位是基因，其遗传信

息贮存在DNA(去氧核糖核酸)分子的碱基序列之中。

结构基因就是决定特殊蛋白质遗传密码的DNA的一

个片段。

一、运用单细胞双重巢式PCR和MDA技术方法

行性连锁遗传病诊断

方法1、提取男女单个淋巴细胞各150例，共300

个细胞。随机分成3组，每组男女细胞各50个，双重

巢式PCR技术在单细胞水平同时扩增X-类固醇硫酸

脂酶基因(steroidsulfatasegene，STS)/Y-假基因和牙

釉质基因(Amelogenin，AMEL)，对照组用单重巢式

PCR技术在单细胞水平分别扩增两基因，比较单、双

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重巢式PCR技术在单细胞水平的扩增率及性别诊断

正确率。2、应用MDA扩增5个单个淋巴细胞和10

个单个卵裂球全基因组DNA，1%的琼脂糖电泳检测

扩增效率，通过普通PCR即上述巢式PCR的第二轮

的PCR条件检测细胞性别来判断扩增产物的均一性。

结果1、单重巢式PCR扩增男性细胞STS和AMEL

的扩增率和细胞性别诊断的正确率分别是84%、76%

和84%、84%;而双重巢式PCR技术同时扩增上述基

因的扩增率和性别诊断正确率分别为98%、96%。后

者与前两者相比扩增率和性别诊断正确率均明显提

高，差异均有统计学意义(P经济、便捷，值得临床进

一步推广。2、初步预实验可知MDA可以克服单细胞

的模板量少和不可重复实验的缺点。但由于此次预实

验的样本量太小，其稳定性、可靠性还需进一步摸索，

才可以用于单基因病的着床前遗传学诊断和产前诊

断。

二、利用孕妇外周血浆中小片段游离胎儿DNA

进行无创性地中海贫血产前基因诊断的研究

方法：收集157例孕妇的外周血，利用柱吸收的

方法提取血浆中的cffDNA，经琼脂糖凝胶电泳分离富

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集小片段cffDNA，使用二重PCR反应(dulex-PCR)检

测SRY基因和磷酸甘油醛脱氢酶

(glycerol-dehyde-phosphatedehydrogenase，GAPDH)基

因。结果来源于86例孕男胎的孕妇血浆标本的小片段

cffDNA均检出SRY和GAPDH基因，来源于71例孕

女胎的孕妇血浆标本的小片段cffDNA只检出

GAPDH基因。与绒毛/羊水标本检测结果以及产后随

访结果相符。特异性和敏感性分别为100%(157/157)

和100%(86/86)。结论利用琼脂糖凝胶电泳，切胶回收，

可以选择性富集孕妇外周血中的小片段cffDNA，相对

地提高胎儿DNA的含量，结合二重PCR扩增SRY基

因技术可用于无创性产前性连锁遗传疾病和单基因突

变疾病的产前诊断。第二部分利用孕妇外周血浆中

cffDNA进行STR-PCR检测胎儿基因型目的：利用小

片段cffDNA进行D5S818、D7S820、D13S317三个

短串联重复序列(shorttandemrepeat，STR)基因型的分

析，观察提取出来的小片段cffDNA中母源性DNA背

景对实验的影响。方法：收集了62例孕