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PrimaryCultureandPassageCultureforSmallIntestinalEpithelialCellofSmallRatsinVitro答辩人：罗园指导老师：高淑静小鼠小肠上皮细胞的体外原代和传代培养1
答辩内容介绍实验成果的意义和影响实验流程实验结果2
实验成果的意义和影响?国内较早研究该项课题的科研单位之一处于国内同类型院校领先水平华南农大首创（为广东省重点细胞工程实验室的进一步研究起到指导作用）?为动物营养研究从畜体代谢宏观水平进入分子水平创造了实验条件?为病理研究成功构架起模型基础（肠源性细菌内毒素移位败血症高代谢状态继发性组织细胞损害多器官功能衰竭）?使小肠上皮细胞体外培养理论系统化3
小肠结构模式图小肠隐窝4
小肠隐窝模式图5
实验流程实验从04年9月至今已历时9个月，目前仍在进行研究整个研究项目由三个子实验构成A小肠绒毛上皮细胞体外培养B小肠隐窝上皮细胞体外培养C碱性磷酸酶染色观察6
A小肠绒毛上皮细胞的体外培养小肠绒毛上皮细胞的获取和纯化小肠绒毛上皮细胞的体外培养不同细胞获取方式的对比灌肠消化法组织块消化法7
B小肠隐窝上皮细胞的体外培养小肠隐窝上皮细胞的获取和纯化机械刮肠消化法小肠隐窝上皮细胞的体外原代培养小肠隐窝上皮细胞的体外传代培养不同实验条件下的平行对照观察过滤方法抗菌素浓度消化时间血清种类酶种类培养湿度变化其他条件8
C碱性磷酸酶染色观察细胞纯化孵育液孵化染色观察结果9
实验结果观察及结论小肠上皮细胞体外培养体系最佳方法机械刮肠消化法小肠上皮细胞体外培养体系最适条件培养液的pH值在7274；培养箱的CO2浓度为5％，饱和湿度；血清选用胎牛血清，并可添加促生长因子；培养液的血清浓度为10％；基础培养基选用DMEM；正常抗生素浓度；细胞接种数为104的数量级。10
小肠上皮细胞体外培养观察结果11
谢谢聆听！请专家指导提问！小鼠小肠上皮细胞的体外培养12
谢谢观看
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