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第50讲微生物的培养技术及应用
课标内容(1)阐明在发酵工程中防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的前提。(2)阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。(3)举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。(4)概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。
(5)概述稀释涂布平板法和显微镜直接计数法是测定微生物数量的常用方法。
考点一微生物的基本培养技术
1.培养基的配制
(1)培养基的概念、类型和用途
(2)培养基的配方
①主要营养物质：水、碳源、氮源、无机盐。
②其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表：
微生物
乳酸菌
霉菌
细菌
厌氧微生物
特殊需求
添加维生素
pH调至酸性
pH调至中性或弱碱性
无氧
2.无菌技术
(1)目的获得纯净的培养物。
(2)关键防止杂菌污染。
(3)常用方法消毒和灭菌。
(4)无菌技术的主要方法及适用对象(连一连)
3.微生物的纯培养
(1)概念辨析
(2)酵母菌纯培养的操作步骤
下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析并回答下列问题：
(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？_____________________。
(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？_____________________________
____________________________________________________________________。
(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？
____________________________________________________________________。
提示(1)获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获得图B效果的接种方法为平板划线法
(2)最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌
(3)火焰附近存在着无菌区域
1.倒平板的操作步骤
①培养基要冷却到50℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。
②要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
③倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。
④平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
2.平板划线法操作步骤
(1)实验成功关键点
(2)平板划线法操作中几次灼烧接种环的目的
考向1结合培养基的配制和无菌技术，考查科学思维
1.(2024·广东深圳联考)某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是()
A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等
B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种
C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基
D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的
答案C
解析从实验结果看，贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少，并不能说明洗手后的操作不会污染培养基，C错误。
2.(2024·西安高新一中模拟)在实验室培养微生物，需要人为地为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法正确的是()
A.培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全
B.培养基中必须添加琼脂
C.培养基制备中均需调节pH至酸性
D.无论哪种培养基均需要灭菌
答案D
解析培养固氮微生物时，培养基中可以不添加氮源，A错误；只有配制固体(或半固体)培养基时才需要添加琼脂，B错误；适宜的pH是微生物生长的必需条件，因此配制过程中需要调节pH，培养霉菌时一般需要将pH调至酸性，培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性，C错误；培养基均需要灭菌，D正确。
考向2结合微生物的纯培养，考查科学探究能力
3.(2024·东北育才中学模拟)下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是()
A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分
B.接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧
C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线
D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污
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