动物繁殖学：干细胞、克隆与转基因技术.ppt

511423876910121311哺乳动物细胞核移植示意图1.供体2.MⅡ期卵子3.去核4.核供体胚胎5.体细胞传代培养6.分离的卵裂球7.G0/G1期体细胞8.去核的卵子9.胞质-核供体复合体10.平行电极细胞融合11.针式电极细胞融合12.重构胚13.囊胚获得克隆动物必须具备的条件：供体细胞核受体卵母细胞胚胎移植的受体（胚胎细胞或体细胞）体细胞克隆技术又称体细胞核移植技术，它是把高度分化的体细胞的细胞核移入去核卵母细胞中，使重构胚发育成为与供体遗传物质完全相同个体的技术。二、体细胞克隆技术定义它与胚胎克隆技术相比，有两大优点：第一，同一遗传性状供体核的数量可无限获得；第二，可通过对供体细胞的改造，加速家畜品种改良或生产转基因动物。三、体细胞克隆技术的关键环节体细胞克隆的主要技术程序与胚胎细胞克隆基本相同，主要差别在供体细胞的选择。供体细胞可通过血清饥饿或接触抑制获得（供体细胞要处于G0/G1期）。自然状态的G0期细胞（如卵丘细胞）和G1期细胞（胎儿成纤维细胞），可直接移入去核卵母细胞中生产克隆胚胎。受体卵母细胞供体核细胞成熟卵母细胞去核细胞周期同期化细胞融合重构胚激活重构胚培养操作人员技术四、影响核移植效果的主要因素五、核移植技术应用前景1．迅速扩繁优良畜种，加快育种进展2．生产转基因动物核移植技术可以与转基因技术结合起来，生产转基因克隆动物。3．加深核质互作关系的研究通过核移植技术，可以深入研究动物个体发生的核质互作关系。4．肿瘤和癌细胞基因活动研究利用核移植技术先将肿瘤或癌细胞的核移入卵母细胞，再研究重构胚的发育情况和基因调控规律，以便为肿瘤和癌症的治疗提供依据。1．效率低目前，胚胎克隆动物成功率在5%~10%，体细胞克隆动物在1%~6%。这是由于核移植的技术环节太多，每个环节都对核移植的效果产生直接的影响。目前基因组重编程的确切机制尚未阐明，配制的体外培养液和操作液不能完全满足受体卵子、供体细胞及重构胚的要求。六、核移植技术存在的问题2．流产率、后代死亡率高在克隆效率相对较高的克隆牛中流产率高达20%~50%。剖检结果表明，部分犊牛胎盘功能不完善，其血液中含氧量及生长因子的浓度都低于正常水平。另外，有些克隆牛犊脾脏、胸腺和淋巴结等未能正常发育，还有些牛犊右心室异常，这是导致克隆动物流产和出生后死亡的一个重要原因。3．出生重过大造成难产克隆动物在妊娠期间体重及出生重远远超过非克隆个体，这可能是由于克隆个体在胎儿阶段发育失衡造成。对克隆牛出生10min内测定的结果，血浆中甲状腺素和3-碘化甲状腺氨酸水平都明显低于对照组，而胰岛素水平却明显高于对照组，这也许是克隆牛犊出生重普遍偏高的原因之一。另外，由于培养基中血清的存在，导致早期胚胎基因表达发生改变，致使许多克隆动物出生重增加。第四讲干细胞、克隆与转基因技术概述转基因动物的研究意义转基因动物制备的主要环节转基因动物研究面临的主要问题动物转基因技术转基因动物，是指通过人为方法导入外源基因，在染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。整合到动物基因组上的外源结构基因称为转基因。在制备转基因动物时，外源基因可能只整合入动物部分组织细胞的基因组，也可能整合进动物所有细胞的基因组中，因而其遗传的稳定性就会有所不同。概述超级鼠的诞生—动物转基因发展的里程碑动物转基因技术已成为当今生命科学中一个发展最快、最热门的领域，相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼和猫等动物获得转基因成功。转基因动物正在改变着农业生产、生物医药甚至是整个生命科学的研究与发展面貌。绪论第一讲胚胎移植技术（一）第二讲胚胎移植技术（二）第三讲胚胎体外生产、性控与保存技术第四讲干细胞、克隆与转基因技术第十单元配子与胚胎生物工程技术第四讲干细胞、克隆与转基因技术干细胞概念及分类胚胎干细胞的特性胚胎干细胞的应用胚胎干细胞技术存在的主要问题诱导多能干细胞动物胚胎干细胞技术一、干细胞（Stemcell）的概念及分类具有不断增殖和分化的能力，在一定条件下可形成不同的细胞、组织、器官和系统。根据细胞来源分类：胚胎---胚胎干细胞ESC