动物繁殖学：胚胎体外生产、性控与保存技术.ppt

2．分子生物学法此法的理论依据是SRY基因仅存在于Y染色体上。因此，通过分子生物学技术鉴别胚胎细胞是否存在SRY基因，就能鉴别出雄性胚胎和雌性胚胎。目前常用的方法是聚合酶链反应PCR（PolymeraseChainReaction）鉴定法和荧光原位杂交法（fluorescenceinsituhybridization，FISH）两种。PCR法用PCR扩增SRY基因，阳性胚胎为雄性，阴性胚胎是雌性，准确率达90%。与胚胎分割等技术结合起来，先将胚胎分割，一小半用于PCR鉴定，另一大半用于鉴定后的移植。这种方法取样细胞少，对胚胎的损伤小、快速而准确，准确率高达90%以上。目前广泛应用于家畜，特别是牛、羊胚胎的性别鉴定。这种方法在操作过程中偶尔会丢失细胞，也会被血清DNA污染而导致误判。因此，操作要谨慎细致，严格消毒，防止污染。环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)，是一种新型的核酸扩增方法，其特点是对目标基因的6个区段设定雄性特异性以及雌雄共同引物（4种），利用特殊的链置换型DNA聚合酶，在65℃的恒温条件下对胚细胞中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有核酸序列进行扩增反应，最后通过反应过程中获得的副产物焦磷酸镁与反应溶液中的镁离子反应形成的白色沉淀来进行早期胚胎性别的鉴定。牛胚胎的LAMP性别鉴定不需要繁琐的电泳来进行检测和鉴定♂♂♂♂从上述现状来看，在动物生产中应用现代分子新技术，对早期胚胎进行快速、准确的性别鉴定是可行的，可以获得所需性别的后代。但由于早期胚胎性别鉴定需从胚胎上采取少量细胞，因而性别鉴定的胚胎经冷冻-解冻处理后仅有少量胚胎存活，导致胚胎移植成功率下降，同时劣质胚胎的性别鉴定成功率更低，这就制约了提供预知性别动物胚胎的商业化进程。因此，发展一种快速、准确，且尽量减少对胚胎产生损害的非伤害性胚胎性别鉴定方法，这是今后共同研究的目标。第三讲胚胎体外生产、性控与保存技术胚胎冷冻技术的定义胚胎冷冻技术的意义胚胎冷冻技术的原理胚胎冷冻技术的方法胚胎冷冻保存技术一、胚胎冷冻的定义胚胎冷冻保存（cryopreservationofembryos）就是通过采用冷冻保护剂和降温措施对动物的早期胚胎进行冷冻，使其能在超低温条件下长期保存。胚胎冷冻与卵子和精子的难易不同，方法类似。二、胚胎冷冻的意义适应于胚胎移植的产业化，胚胎移植不受时间和空间的限制，能严格筛选受体，保证受体质量，提高受胎率。便于胚胎运输，解决引种与运输种畜的困难，减少和防止传染病传播，可广泛进行国际和国内优良品种交流。建立胚胎库，长期保存优良家畜与濒危动物的遗传资源。

三、胚胎冷冻原理哺乳动物的胚胎细胞中，水分占细胞质的80%以上，当这些细胞在等渗溶液中冷却至冰点以下时，经维持一定的过冷状态后，细胞的内外均形成大量冰晶，从而导致细胞死亡。如果采用合理的冷冻方法，加入冷冻保护剂，把细胞内的冰晶降低到最小程度，就能避免或减少冷冻伤害，使其处在超低温（液氮-196℃，液氦-269℃）下，代谢完全停止，升温后细胞又恢复活性，从而达到长期保存的目的。绪论*第一讲胚胎移植技术（一）第二讲胚胎移植技术（二）第三讲胚胎体外生产、性控与保存技术第四讲干细胞、克隆与转基因技术第十单元配子与胚胎生物工程技术第三讲胚胎体外生产、性控与保存技术IVF技术的概念与意义IVF技术的基本操作程序IVF技术的现状及存在问题IVF技术的研究方向体外受精技术一、IVF技术的概念与意义在自然条件下，哺乳动物精子和卵子的受精过程是在输卵管内完成的。将精子和卵子分别从公、母畜内取出并经过一系列的处理，使精卵在体外条件下结合的过程，称为体外受精（invitrofertilization，IVF）。由于卵子和精子的受精过程是在实验室中完成，因而，通过这一技术而产下的动物又称为“试管动物”。同时，由于体外受精技术与胚胎移植技术（ET）密切相连，又称为IVF-ET。随着哺乳动物胚胎工程技术的深入研究、胚胎国际贸易的发展、商业性胚胎移植技术的迅猛发展,对胚胎的需求量日益增加。单纯依靠超数排卵获得胚胎的方法,成本高，时间长，步骤多，远远不能满足科学研究和生产的需求。IVF技术是继人工授精、胚胎移植技术之后,家畜繁殖领域的“第三次革命”。1、为体外工厂化大量生产质优价廉的胚胎提供了可能，现已将牛卵母细胞体外成熟—体外受精—早期胚胎的体外发育，结合冷冻保存，生产出了大量试管犊牛，逐步建立了工厂化生产胚胎的成套技术。一、IVF技术的概念与意义2、为动物克隆、胚胎性别鉴定和转基