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吸收放散试验在输血科的应用

吸收放散试验的是应用特异性抗原与抗体的结合是可逆的这一原理，用于检测红细胞表面存在的弱血型抗原，鉴定分离血清中可能存在的混合抗体，辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。对于临床输血工作具有重要临床意义。现在介绍一下吸收放散试验的基本原理，临床应用，操作技术及注意事项。

一、吸收放散试验的原理：

吸收试验的原理

抗原与抗体的结合是特异性的，含有抗体活性的血清加加入相应抗原红细胞后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收，吸收后抗体活性下降或消失，说明未知抗体中含有与已知抗原相对应的抗体。当被检血清中含有多种抗体时，可用已知抗原分别吸收用于鉴定抗体的特异性。

放散试验的原理

抗原与抗体的结合是可逆的，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。

二、吸收放散试验的临床应用

1.鉴定新生儿溶血病致敏患儿红细胞上的抗体

2.在溶血性贫血和可疑输血反应中，鉴定DAT阳性红细胞抗体

3.检测红细胞表面存在的弱血型抗原

4.鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体

5.辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定

6.从DAT阳性红细胞上去除抗体

7.制备可用于自身吸收或鉴定血型的红细胞等

三、吸收试验方法

1.吸收试验的准备：

1）.生理盐水洗涤压积红细胞至少3遍，最后一次洗涤后，彻底倾去上清液

2）.根据待检红细胞的特性（如怀疑是弱A抗原红细胞，则加入1ml抗A；如怀疑是弱B抗原红细胞，则加入1ml抗B）将抗血清加入洗涤过的压积红细胞中

2.吸收试验的操作：

1）冷吸收：一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置4℃冰箱吸收1~2小时(ABO、MN、P血型系统等)

2）温吸收：一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置37℃水浴箱中吸收1小时(Rh血型系统等)

3）离心，去除所有上清试剂，将红细胞转移到另一干净试管中。

4）用较大体积（10mL或更多）生理盐水洗涤红细胞至少8遍，保存最后一遍洗涤离心后的上清液，用于检测是否残留游离抗体

5）吸收试验可用于区别真假凝集：真凝集经吸收后凝集减弱或呈阴性；假凝集经吸收后凝集不变

6）如果吸收后血清仍有活性，证明抗体未被完全吸收

7）血清不反应，证明抗体被完全吸收

四、放散试验的操作：

用放散试验技术将大量附着于红细胞上的抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体的溶液称为放散液。放散液中的抗体具有特异性，可以与相应抗原结合，从而可以进一步确定抗体的特异性，常用放散方法有热放散和酸放散

1、热放散法

热放散试验主要应用ABO血型系统新生儿溶血病及从红细胞上洗脱掉IgM及IgG抗体。此方法制备抗体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱，放散试验可得到假阴性的结果。优点是适用于一般化验室，缺点是放散液中含有较多游离白蛋白。

1）将与压积红细胞等体积的生理盐水加入试管中，轻轻混匀红细胞，置56℃水浴中10分钟，不时地轻摇试管，1000g离心3分钟，上清液是否留用，应视实验目的而定。

2）通过DAT试验检测放散红细胞放散效果。DAT阴性，留取红细胞待用；DAT阳性，重复以上步骤，直到DAT阴性为止。

3）热放散试验注意事项

鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗体较弱，可用酶处理红细胞做试验。放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，用AB血清进行放散，受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，若抗体弱，可以充分与红细胞结合;热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗体又会重新与抗原结合;放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复合物上分离下来。

2、酸放散试验

酸放散试验主要应用于温自身抗体(IgG)或同种抗体引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物。其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫血，鉴定Rh抗体效果最好，不宜用于ABO抗体鉴定。

1）取经洗涤3次的受检压积红细胞1份，加1份酸放散洗脱液，封紧试管口，颠倒试管，使红细胞与酸放散液充分接触混匀

2）3000转/分离心5分钟

3）离心后分离上清到一支干净的试管

4）在上清液中滴入中和液，每滴入一滴即混匀上清，未变色再滴入一滴，直至上清液变色

5）放散液与谱红细胞做间接抗球蛋白试验，以鉴定抗体特异性

6）酸放散后红细胞不能继续使用