基因表达载体的构建 教学课件.pptx

基因表达载体的构建

1.目的基因筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序

1、目的：2）使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代基因表达载体的构建第二步——基因工程的核心

一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游（首端），紧挨转录的起始位点，是RNA聚合酶的识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。启动子有时为满足应用需要，会在载体中人工构建诱导型启动子。诱导物存在时，可激活或抑制目的基因的表达。

终止子一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的下游（尾端），标志着转录的停止。

作用：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，筛选含有目的基因的受体细胞。标记基因抗生素抗性基因，荧光蛋白基因等。如

a.目的基因b.启动子c.终止子d.标记基因（抗生素抗性基因）表达特定性状位于基因的首端,是RNA聚合酶结合位点，基因转录的开始位于基因的末端,终止转录检测目的基因是否导入受体细胞e、复制原点：DNA聚合酶结合位点总结

启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别?项目启动子终止子起始密码子终止密码子化学成分DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基位置目的基因首端目的基因尾端mRNA首端mRNA尾端作用RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出RNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束

3.基因表达载体构建的过程用产生互补末端的酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用酶把两者连接(如图)。限制DNA连接

3.基因表达载体的构建过程单酶切(a酶）①质粒重新环化②质粒与目的基因反向连接③目的基因自身环化④产生质粒与质粒的连接产物以及目的基因与目的基因的连接产物。的缺点

1972年，美国斯坦福大学伯格教授小组实现了世界首例DNA重组分子，并因此获得1980年诺贝尔化学奖。猿猴病毒SV40的DNA?噬菌体DNA分子HindⅢ限制性核酸内切酶相同的黏性末端DNA连接酶重组DNA分子

非洲爪蟾核糖体蛋白基因质粒pSC101EcoRⅠ限制性核酸内切酶相同的末端DNA连接酶重组DNA分子成功表达非洲爪蟾核糖体蛋白导入大肠杆菌1973年，博耶和科恩将非洲爪蟾核糖体蛋白基因导入大肠杆菌并成功表达。

3.基因表达载体的构建过程双酶切(a酶和b酶）优点①防止质粒重新环化②防止质粒与目的基因反向连接③防目的基因自身环化④避免质粒与质粒以及目的基因与目的基因的自身大量连接,提高正确连接的效率。

【例1】下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）A.切割含抗虫基因的DNA片段和载体必须用同一种限制酶B.抗虫基因表达载体中要有启动子和终止密码子C.抗虫基因表达载体必须具备标记基因，其作用是筛选含有目的基因的受体细胞D.抗虫基因的表达启动于复制原点C

【例2】如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来C.除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构D.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠD

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