蛋白质结构的分析.ppt

产生这一现象的原因是由于二个核的空间位置很靠近，相互弛豫较强，当A受到照射达饱和时，它要把能量转移给B，于是B吸收的能量增多，共振信号增大。这一效应的大小与核间距离的六次方成反比。第32页,共46页，星期六，2024年，5月NMR对蛋白结构的测定要测定大分子物质就需要利用二维核磁共振以及多维核磁共振。一维核磁共振是在一个脉冲之后的t1时间进行数据收集，二维核磁共振在t1时间后再加一个脉冲后在t2时间内收集数据S（t1，t2），然后分别以t2和t1为变量进行傅立叶变换就得到二维谱S（w1，w2）。二维谱就是把作为对角线的一维谱的峰进一步分开。第33页,共46页，星期六，2024年，5月在生物学研究中最常用的是两种谱：相关谱（correlatedspectroscopy，COSY）和增强谱（NuclearOverhauserEnhancementSpectroscopy，NOESY）。COSY也有显示J偶合的同核位移相关谱和异核自旋－自旋偶合。如果已知蛋白质的一级结构中氨基酸残基的连接顺序，则通过COSY谱可以很容易地辨认出每个峰的归属。而NOESY谱是指两个没有自旋自旋耦合的核，若在空间距离上小于0.5nm时，辐照其中一个核使之饱和，另一个核的信号强度会增强而产生交叉峰。这种交叉峰地面积大小与两核间距的六次方成反比。因此可以利用这两种谱，第一步COSY谱指认出产生共振峰的核，第二步是从J偶合和NOESY谱确定的NOE值确定出二级结构的类型以及核间距离，根据核间距离构建出三级结构的模型。第34页,共46页，星期六，2024年，5月三.红外光谱和拉曼光谱分子红外光谱是由分子不停地作振动和转动而产生的。分子振动是指分子中各原子在平衡位置附近作相对运动，多原子分子可组成多种振动模式。含N个原子的分子应有3N－6个简正振动方式；如果是线性分子，只有3N－5个简正振动方式。图中示出非线性3原子分子仅有的3种简正振动模式。分子的转动指的是分子绕质心进行的运动。分子振动和转动的能量不是连续的，而是量子化的。当分子由一种振动（或转动）状态跃迁至另一种振动（或转动）状态时，就要吸收或发射与其能级差相应的光。第35页,共46页，星期六，2024年，5月第36页,共46页，星期六，2024年，5月拉曼光谱指：当光穿过透明介质被分子散射的光发生频率变化，这一现象称为拉曼散射。在透明介质的散射光谱中，频率与入射光频率相同的成分称为瑞利散射；频率对称分布在两侧的谱线或谱带即为拉曼光谱，其中频率较小的成分又称为斯托克斯线，频率较大的成分又称为反斯托克斯线。拉曼光谱的理论解释是，入射光子与分子发生非弹性散射，分子吸收频率为υ0的光子，发射υ0－υ1的光子，同时分子从低能态跃迁到高能态（斯托克斯线）；分子吸收频率为υ0的光子，发射υ0＋υ1的光子，同时分子从高能态跃迁到低能态（反斯托克斯线)。第37页,共46页，星期六，2024年，5月偶极矩与极化度：分子偶极矩可由键偶极矩经矢量加法后得到（这里只涉及分子）。若将极性分子置于均匀的外电场中，分子将沿电场方向转动，同时还会发生电子云对分子骨架的相对移动和分子骨架的变形，称为极化。红外光谱和拉曼光谱主要在外表上的区别就用“偶极矩与极化度”来解释。第38页,共46页，星期六，2024年，5月红外光谱和拉曼光谱对蛋白结构的测定傅里叶变换-IR测量蛋白中功能基团和高极性键的振动。在其对蛋白二级结构测定中，最受关注的是酰胺基团中C=O键伸展的结构，同时伴随着N-HC-N键的伸展，对氢键和二级结构敏感。拉曼光谱常用于金属蛋白，其生色团的电子跃迁配合金属中心产生了更加强劲的基本拉曼效应。配基的振动模式被急剧加强，这对鉴定蛋白金属中心的结构组织相当有用。第39页,共46页，星期六，2024年，5月四旋光光谱和圆二色光谱旋光光谱：许多物质具有旋光性（又称光学活性），如含有手性碳原子的有机化合物。当平面偏振光通过这些物质（液体或溶液）时，偏振光的振动平面向左或向右旋转，这种现象称为旋光。偏振光旋转的角度称为旋光度。平面偏振光可分解为振幅、频率相同,旋转方向相反的两圆偏振光。第40页,共46页，星期六，2024年，5月其中电矢量以顺时针方向旋转的称为右旋圆偏振光,其中以逆时针方向旋转的称为左旋圆偏振光。两束振幅、频率相同,旋转方向相反的偏振光也可以合成为一束平面偏振光。第41页,共46页，星期六，2024年，5月第42页,共46页，星期六，2024年，5月当介质有对称结构时，左旋圆偏振光和右旋圆偏振光在该介质中的传播速度相同，表现为他们的折射率nLn