大学课程细胞生物学实验动物细胞培养1课件.pptVIP

*************标准程序：?当温度在-25℃以上时，1～2℃/min?当温度达-25℃以下时，5～10℃/min?当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中*对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性细胞株或系。*悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团。生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态。观察不方便**操作时，细胞表面上与其它细胞及支持物黏附与连接的分子被破坏，细胞受到损伤*MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。**物镜和聚光器上分别增加了相差环；细胞厚度不同使光线发生折射，通过相差环聚焦于目镜，产生亮影像，而背景光线被吸收，产生暗背景。**蛋白酶消化分离细胞消化酶的选择胰蛋白酶Trypsin:终浓度0.25