实验七肉制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定.pdfVIP

实验八肉制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

一、亚硝酸盐测定

（一）原理:样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下与对氨基苯磺酸重氮化以后，

再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。

（二）试剂

1.氯化铵缓冲液：在1L玻璃烧杯中，加入500ml水，准确加入20ml盐酸，混匀，准确

加入50ml氨水，必要时用稀盐酸和稀氨水调试至pH9.6-9.7。

2.硫酸锌溶液（0.42mol/L）：称取120g硫酸锌用水溶解，并稀释至1000ml。

3.氢氧化钠溶液（20g/L）:称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1000ml。

4.对氨基苯磺酸溶液：称取1g对氨基苯磺酸，溶于70ml水和30ml醋酸中，置棕色瓶

中混匀，室温保存。

5.N-1-萘基乙二胺溶液：称取0.1gN-1-萘基乙二胺，加60%醋酸溶解，并稀释至

100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。

6.显色剂：临用前将N-1-萘基乙二胺和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。

7.亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.2500g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶

解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光

保存，此溶液每亳升相当于500ug的亚硝酸钠，作准备液。

8.亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.0ml置于100ml容量瓶中，

加水稀至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug亚硝酸钠。

（三）仪器：小型绞肉机，匀浆器，分光光度计。

（四）操作方法

1.样品处理：称取约10.0g（粮食取5g）经绞碎混匀的样品，置于匀浆器中，加70ml水

和12ml的氢氧化钠溶液，混匀，用氢氧化钠溶液调样品pH=8，定量转移至250ml容量

瓶中，加10ml硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2-5ml氢氧化钠，混匀，

置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，除去上

层脂肪，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，收集滤液备用。

2.测定

（1）亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0、0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml

亚硝酸钠标准使用液分别置于25ml具塞比色管中，于标准管中分别加入4.5ml氯化铵缓

冲，加2.5ml60%醋酸后，立即加入5.0ml显色剂，加水至零点，于波长550nm处测吸光

度，绘制标准曲线，求出回归方程。

低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml

亚硝酸盐标准使用液（相当于0，2，4，8，1.0ug亚硝酸钠）

（2）样品测定：吸取10样品滤液于25ml具塞红色管中，其它试剂按标准系列法操作，

同时做试剂空白。

二、硝酸盐测定

（一）原理：样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，溶液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原

成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N-1-萘基乙

二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。

镉柱每次使用完毕后，应先以25ml盐酸洗涤，再以水洗两次，每次25后用水覆盖镉柱。

柱先加25ml氯化铵缓冲液，至液面接近海绵镉时，吸取2ml