O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定.pdfVIP

８一重庆医科大学学报２０１３年第３８卷第１期（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ２０１３．ＶＯＩ．３８Ｎｏ．１】

譬ＤＯＩ：１０．３９６９６．ｉｓｓｎ．０２５３－３６２６．２０１３．０１．００３

Ｏ１群ｄ，ＪＩＩ型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

张娟，吴倩，彭辉，何岸。，陈维贤，黄爱龙，郑建

（１．重庆医科大学附属第二医院输血科，重庆４０００１０；２．重庆医科大学附属第二医院检验科，重庆４０００１０；

３．重庆医科大学临床医学一系，重庆４０００１６；４．重庆医科大学感染性疾病教育部重点实验室，重庆４０００１６）

【摘要】目的：以纯化的有高度特异性的ＩＸｉａｏＧ单抗为靶分子，对噬菌体随机７肽库进行淘筛，以期筛选到与０１群小川型霍

乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽，为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法：运用噬菌体随机７肽库技术，

以纯化的ＩＸｉａｏＧ６单抗为靶蛋白，进行噬菌体随机肽库３轮筛选，以双抗夹心ＥＬＩＳＡ和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽

与筛选配基的结合能力及特异性，并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果：３轮筛选后，阳性噬菌体得到有效富集，夹心

ＥＬＩＳＡ检测随机挑取的２５个噬菌体克隆，有２２个噬菌体克隆为阳性，测序表明其中２０个阳性克隆的氨基酸序列完全一致，均

为ＡＰＡＩＰＡＳ。对该序列同源性分析，未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明，叭群小川型霍乱弧菌脂多糖（１ｉｐｏｐｏ—

ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）￣好地抑制阳性克隆与ＩＸｉａｏ，ＧＭｃＡｂ的结合，抑制程度随ＬＰＳ浓度的升高而增加，而对照细菌的ＬＰＳ则

不具有相应的抑制作用，进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了０１群小川型霍乱弧菌ＬＰＳ抗原表位。结论：筛选到模拟０１群小

川Ｉ型霍乱弧菌ＬＰＳ的抗原表位的模拟肽，为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。

【关键词】０１群小川型霍乱弧菌；单克隆抗体；噬菌体随机肽库；模拟肽

【中国图书分类法分类号】Ｒ５１６．５【文献标志码】Ａ【收稿日期】２０１２—０４—０９

ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｉｐｔｏｐｅｍｉｍｉＣｐｅｐｔｉｄｅｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ

ａｇａｉｎｓｔｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ０ｓｅｒ１ｏｔｙｐｅＯｇａｗａ

ＺＨＡＮＧＪｕａｎ，ＱｉｏｌｔＰＥＮＧＨｕｉ２，ＨＥＡ，ＣＨＥＮＷｅｉｘｉａｎｚ，ＨＵＡＮＧＡｉｌｏｎｇ４，ＺＨＥＮＧＪｉａｎ

．Ｄｅ（ｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｌｏｏｄＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；

２．ＤｅｐａｒｍｔｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；

３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；４．ＫｅｙＬｂａｏｒａｔｏｒｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓＤｉｓｅａｓｅｓ，

ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）

Ａｂ【ｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｍｍｉｉｃｐｅｐｔｉｄｅｈｉｇｈｌｙｂｉｎｄｉｎｇｔｏｃｈｏｌｅｒａｅＯ１ｓｅｒｏｔｙｐｅＯｇａｗａｂｙｕｓｉｎｇｐｕｒｉｆｉｅｄＩＸｉａｏ３ＧＭｃ６Ａｂｔ