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ELISA实验报告

-森贝伽生物实验技术中心

前言

酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）的基本

原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗

原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活

性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标

抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使

固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶

量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变

为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深

浅刊物定性或定量分析。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、

血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或

受体）的水平。

材料与方法

1材料

1.1主要试剂

ELISA检测试剂盒(From：森贝伽生物/SenBeiJia)

1.2主要仪器及耗材

酶标仪：芬兰（LabsystemsMultiskanMS）公司产品

洗板机：芬兰（ThermoLabsystems）公司产品

离心机：微量高速离心机（国产）

移液器：吉尔森P型移液器(Pipetman)产品

培养箱：隔水式恒温培养箱（国产）产品

其他所需耗材均为国产。

2方法

2.1实验过程

（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔

加样量都为50μL；

（2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样

品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；

（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）

倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec

后弃去，如此重复5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；

（6）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；

（7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec

后弃去，如此重复5次，拍干；

（8）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，

37℃避光显色15min；

（9）终止：每孔加终止液50μL，终止反应；

（10）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测

定应在加终止液后15min以内进行。

2.2计算

以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，计算出标准曲线的多项式二次

回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即

为样品的实际浓度。

实验结果举例（相关技术问题可咨询我们）

编号OD值浓度（ng/L）

空白0.0320

标11.986240

标21.341160

标30.72380

标40.41140

标50.19620

1—10.447238.501

1—20.598