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玉米皮类黄酮超声波提取工艺优化及其抗氧化活性研究

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王鹏+郭丽+周凤超

摘要：以玉米皮为原料，分析液料比、乙醇体积分数、提取温度和超声时间等单因素对类黄酮得率的影响，利用响应面法优化超声波辅助提取类黄酮物质工艺，优化玉米皮制备天然抗氧化剂的提取工艺；通过测定所提取类黄酮物质的清除自由基能力，评价玉米皮类黄酮物质的抗氧化活性。结果表明：玉米皮类黄酮物质提取的最佳工艺条件为料液比1g∶25mL、乙醇体积分数50%、提取温度33℃、超声时间57min，类黄酮物质的得率为12.96mg/g；在优化条件下，类黄酮物质得率的试验验证值与预测值误差在±1.0%之内。在上述优化工艺前提下，发现玉米皮类黄酮物质对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基均具有较强清除作用，其半数抑制浓度分别为8.436、0.825、0.621mg/mL。

关键词：玉米皮；类黄酮；响应面法；超声波；抗氧化

：R284.2文献标志码：A

：1002-1302（2016）11-0337-04

玉米是禾本科蜀黍属一年生草本植物，我国玉米产量位居世界第2位，其中玉米皮作为玉米深加工的副产物，年产量可达到2000万t。玉米皮的综合利用，多以饲料为主。近年来，玉米皮的开发利用集中在功能性物质的提取方面，有研究者从玉米皮中提取了多肽、多糖、黄色素等功能性物质[1-3]。研究发现，在玉米等禾本科植物细胞壁中含有一定量的阿魏酸、对香豆酸、芥子酸等类黄酮物质[4]，在细胞壁中与多糖和木质素进行交联。这些类黄酮物质具有许多生理功能，如清除自由基、抗紫外线辐射、抗血栓、降血脂、防治冠心病、抗菌消炎、止痛、抗突变、防癌、增强精子活力以及调节人体免疫功能等[5-7]。超声波提取技术广泛应用于植物类原料类黄酮物质的提取工艺中，该技术利用超声波具有的机械效应、热效应和空化效应，通过破坏细胞组织、增大提取溶剂分子的运动速度和穿透力以获得生物有效成分，具有提取时间短、效率高的优势[8-10]。本试验采用响应面法优化超声波辅助提取玉米皮类黄酮物质工艺，并进一步研究玉米皮类黄酮物质的抗氧化活性，以期为开发利用类黄酮等天然抗氧化剂提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

玉米皮：购自黑龙江省绥化市望奎县，分离、粉碎成粉后过20目筛。

试剂：1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、芸香苷、三羟基氨基甲烷（Tris）均购自美国Sigma-Aldrich公司，维生素C、邻二氮菲、FeSO4、邻苯三酚、无水乙醇均为分析纯。

1.2仪器

KQ-200VDE型双频数控超声波清洗器，购自昆山市超声仪器有限公司；TU1901紫外-可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限责任公司；FW100高速万能粉碎机，购自天津市泰斯特仪器有限公司；XT120A电子天平，购自瑞士普利赛斯有限公司；GL-16G-Ⅱ冷冻离心机，购自上海安亭科学仪器厂。

1.3试验方法

1.3.1玉米皮类黄酮物质的提取准确称取2.0g玉米皮粉，加入乙醇溶液，放入功率180W、45kHz超声波清洗仪中，在不同温度和时间下超声处理提取类黄酮，以3000r/min离心10min，上清液为玉米皮类黄酮提取液。

1.3.2类黄酮物质含量的测定采用Chun等的方法[11]测定玉米皮类黄酮物质含量。精确吸取芦丁标准溶液体积分别为0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置于10mL比色管中。加入0.4mL5%亚硝酸钠溶液摇匀，放置6min，再加入0.4mL10%氯化铝溶液，摇匀，放置6min，加入4.0mL4%氢氧化钠溶液，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀后放置15min。使用紫外-可见分光光度计在510nm测定吸光度，并绘制标准曲线。所得标准曲线方程为：y=0.029900x-0.013623（r2=0.9904）。取一定稀释倍数的样品溶液按标准曲线制作方法测定吸光度，利用标准曲线计算样品中类黄酮含量。

1.3.3玉米皮类黄酮物质提取工艺优化

1.3.3.1单因素试验研究料液比、乙醇体积分数、提取温度和超声时间对玉米皮类黄酮物质提取得率的影响。料液比分别取1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35（g∶mL）；乙醇体积分数分别取20%、30%、40%、50%、60%、70%；提取温度分别为20、30、40、50、60℃；超声时间分别为0、30、60、90、120min。

1.3.3.2响应面试验在单因素试验基础上，以X1料液比、X2乙醇体积分数、X3提取温度、X4超声时间为自变量，以玉米皮类黄酮物质提取得率Y为响应值，设计4因素3水平的响应面优化试验。因素水平选取见表1。

1.3.4抗氧化特性分析响应面试验的结果获得