HPLC法测定苦参素注射液中氧化苦参碱的含量.docx

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HPLC法测定苦参素注射液中氧化苦参碱的含量

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【摘要】目的建立苦参素注射液中氧化苦参碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Spherisorb氨基柱（4.6*150mm，5μm），流动相为乙腈-磷酸水溶液（磷酸：三乙胺：水=2:1:97）-乙醇（75:15:10）；流速为2.0ml／min，柱温为30℃，检测波长为220nm，进样量为20μL，理论塔板数按氧化苦参碱计不少于2000。结果氧化苦参碱浓度在0.4814~101233μg范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为99.04%（RSD=0.98%，n=9）。结论该方法简便，快速，准确，可用于苦参素注射液中氧化苦参碱的含量测定。

【关键词】苦参素注射液氧化苦参碱高效液相色谱含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）09-0396-01

苦参素是从中药苦参中提取分离纯化的混合生物碱，其主要成分为氧化苦参碱。目前在临床上广泛用于治疗慢性乙型肝炎和肿瘤治疗、化疗引起的白细胞低下和其他原因引起的白细胞减少症等。本实验参照文献[2]，采用高效液相色谱法测定其含量，该方法快速、稳定性、重现性好。

1仪器与试药

SDP-10AVP-日本岛津高效液相色谱仪，BT25S电子天平；苦参素注射液（市售品，批号分别20100208规格:6ml:0.6g）,氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110780-200405），乙腈为色谱纯，为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备：

紧密称取经P2O540℃减压干燥至恒重的氧化苦参碱对照品10.03mg，置25ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液；再精密量取储备液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备：

精密量取本品2ml至100ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3空白溶液的制备：

取只含辅料的空白样品2ml，按供试品的制备方法制备空白溶液。

2.4色谱条件及系统适用性试验：

色谱柱为Spherisorb氨基柱（4.6*150mm，5μm），流动相：乙腈-磷酸水溶液；流速：2.0ml／min，拄温为30℃，检测波长为220nm，进样量：20μ。分别吸取对照品溶液、供试品溶液及空白溶液各20μL注入高效液相色谱仪并记录色谱图，结果，氧化苦参碱与其他成分峰的分离度符合要求；空白辅料溶液色谱在氧化苦参碱峰保留时间处无色谱峰，即空白无干扰；理论塔板数按氧化苦参碱峰计,不低于2000.

2.5线性关系：

分别精密量取上述对照品储备液1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml，移入25ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。各进样20Μl.以氧化苦参碱峰面积值为纵坐标，以氧化苦参碱量为横坐标，绘制标准曲线，结果见表1；计算得回归方程为；Y=371274X-59594，r=0.9999.氧化苦参碱进样量在0.4814-1.1233μg范围内与峰面积具有良好线性关系。

2.6精密度试验：

取上述对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积积分值，结果，对照品溶液锋面值平均值为238194.0，RSD为0.32%（n=6），说明仪器精密度良好。

2.7稳定性试验：

取同一份供试品溶液，在配置后放置0h，2h，4h，6h，8h，分别按上述色谱条件进样测定，记录峰面积积分值，结果，供试品溶液主成分峰峰面积的RSD为1.1%，表明，供试品溶液在室温下放置8小时内主成分稳定。

2.8重复性试验：

取同一批样品溶液6份，分别按供试品制备方法制得6份供试品，测定氧化苦参碱的含量，其平均含量为99.95%，RSD为0.76%，n=6，表明本法重复性良好。

2.9含量测定：取供试品溶液，按上述色谱条件，进样分析，按外标法以峰面积计算含量。

3讨论

3.1检测波长的选择：

以氧化苦参碱对照品溶液进行紫外光谱扫描，在206nm波长处有最大吸收，220nm处为肩峰。由于溶剂在波长206nm处有吸收，对样品分析有干扰。故选用220nm作为检测波长。

3.2苦参素注射液原标准中，样品需先经717苯乙烯型强碱性阴离子交换树脂分离氧化苦参碱，在采用硫酸滴定液进行滴定，方法繁琐：HPLC法操作简便，快速、准确，可较好的测定苦参素注射液中氧化苦参碱的含量。

参考文献

[1]国家药品标准[S].化学药品地方标准上升国家标准.第十六册：365.

[2]刘铮，王莉.苦参素注射液的临床应用[J].中国新医药2003,2（4）：66

[3]杨凤珍，吕毅，姜秋彦.高效液相色谱法测定苦参素注射液的含量[J].西北药学杂