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DNA的生物合成
(複製)
DNABiosynthesis(Replication);
DNA的生物合成
複製(replication):
以母鏈DNA為範本合成子鏈DNA的過程。;本章主要內容:
?複製的基本規律
?DNA複製的酶學和拓撲學變化
?複製的過程
?逆轉錄和其他複製方式
?DNA損傷(突變)與修復
;複製的基本規律
BasicRulesofDNAReplication;半保留複製(semi-conservativereplication)
雙向複製(bidirectionalreplication)
半不連續複製(semi-discontinuousreplication)
方向性和高保真性;一、半保留複製的實驗依據和意義;全保留式半保留式混合式;DNA半保留複製實驗;按半保留複製方式,子代DNA與親代DNA的堿基序列一致,即子代保留了親代的全部遺傳資訊,體現了遺傳的保守性。;原核生物:?基因組是環狀DNA
?只有一個複製起始點
複製時,DNA從起始點(origin)向兩個方向解鏈,形成兩個延伸相反的複製叉,稱為雙向複製。;複製時雙鏈打開,分開成兩股,各自作為範本,子鏈沿範本延長所形成的Y字形的結構稱為複製叉(replicationfork)。;在原核生物雙向複製中,DNA被描述為眼睛狀。為說明方便而做的圖為?形。;;真核生物:
?染色體DNA有多個複製起始點。
?兩個起始點之間的DNA片段稱為複製子(replicon)。
?複製子是獨立完成複製的功能單位。;真核生物多個複製起始點、複製子與複製叉;真核生物的多複製子複製電鏡圖;;順著解鏈方向生成的子鏈,複製是連續進行的這股鏈稱為領頭鏈。
另一股鏈因為複製的方向與解鏈方向相反,不能順著解鏈方向連續延長,這股不連續複製的鏈稱為隨從鏈。
領頭鏈連續複製而隨從鏈不連續複製,就是複製的半不連續性。;岡崎片段:
?1968年日本生化學者岡崎用電鏡及放射自顯影技術,觀察到DNA複製中出現一些不連續的片段,將這些不連續的片段稱為岡崎片段。
?原核生物:1000~2000個核苷酸
?真核生物:100~200個核苷酸;半不連續複製動畫;DNA複製的酶學
TheEnzymologyofDNAReplication;DNA複製的體系
底物:dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)
聚合酶:依賴DNA的DNA聚合酶(DNA-pol)
範本:解開成單鏈的DNA母鏈
引物:提供3-OH末端的寡核苷酸
其他酶和蛋白質因數:拓撲異構酶、解螺旋酶、單鏈DNA結合蛋白、引物酶、連接酶;一、複製的化學反應;聚合反應的特點;二、DNA聚合酶;1959年獲諾貝爾生理學或醫學獎;;聚合反應的特點
?以單鏈DNA為範本
?以dNTP為原料
?引物提供3-OH
?聚合方向為5→3
?遵守堿基互補規律
;;(一)原核生物的DNA聚合酶
?DNA-polⅠ
?DNA-polⅡ
?DNA-polⅢ
?DNA-polⅣ
?DNA-polⅤ;催化DNA聚合;功能:校讀,去除RNA引物,填補空隙,參與DNA損傷修復。;323個氨基酸;DNA聚合酶II(DNA-polII)
?具有5′→3′的聚合酶活性。
?只是在無polⅠ及polⅢ的情況下暫時
起作用。
?對範本的特異性不高,參與DNA損傷
的應急狀態修復。;DNA聚合酶III(DNA-polIII)
是複製延長中真正起催化作用的酶。
由10種亞基組成不對稱的聚合體。
α,ε,θ亞基組成核心酶,α亞基具有5→3的聚合活性,ε亞基具有3→5外切酶活
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