《3.2 基因工程的基本操作程序》学与练.docxVIP

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3.2基因工程的基本操作程序

Part1目标任务：对接课标，了解目标

Part1目标任务：对接课标，了解目标

Part2预习导学：自主梳理+预习检测，掌握基本知识点

Part3探究提升：代入情景+典例精讲，深入学习知识要点

基因工程的过程

Part4网络梳理：建立知识间的联系

Part5强化训练：必刷经典试题，能力提升

内容

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新课程标准

学习目标

阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建等步骤。

1.阐明基因工程的基本操作程序。

2.描述获取目的基因的方法及基因表达载体的构建。

3.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。

自主梳理

一、目的基因的筛选与获取

1.目的基因的概念

在基因工程的设计和操作中，用于或获得等的基因就是目的基因。根据不同的需要，目的基因不同，主要指的基因。

2.筛选合适的目的基因

从相关的已知和清晰的基因中筛选。

3.利用PCR获取和扩增目的基因

（1）PCR的含义：的缩写，是一项根据的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的进行大量复制的技术。

（2）条件：、DNA模板、、4种脱氧核苷酸等。

（3）PCR扩增的过程

①变性：当温度超过℃时，目的基因DNA受热变性后解聚为。

②复性：当温度下降到℃左右时，通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

③延伸：当温度上升到℃左右时，以为模板，在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸,即将4种脱氧核苷酸加到的3’端。

二、基因表达载体的构建

1．构建基因表达载体的目的

(1)使目的基因在受体细胞中，并且可以给下一代。

(2)使目的基因能够和发挥作用。

2.基因表达载体的构成

基因表达载体是载体的一种，除外，还必须有启动子、终止子等。

（1）启动子：一段有特殊序列结构的片段，位于基因的，紧挨，是RNA聚合酶识别和结合的部位。

（2）终止子：一段有特殊序列结构的片段，位于基因的，使转录在所需要的地方停下来。

3．基因表达载体的构建

首先用一定的切割载体，使它出现一个切口，然后用限制酶或的限制酶切割目的基因的DNA片段，再利用将目的基因片段拼接到载体的切口处。

三、将目的基因导入受体细胞

1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持的过程。

2.转化方法

（1）导入植物细胞

常用方法：花粉管通道法、（适用于双子叶植物或裸子植物）。

（2）导入动物细胞

①常用方法：。

②常用受体细胞：。

（3）导入微生物细胞

①方法：用处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。

②受体细胞：（使用最广泛的是大肠杆菌）。

③原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。

四、目的基因的检测与鉴定

检测水平

检测方法

分子水平检测

通过等技术检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测目的基因是否转录出了.

检测目的基因是否翻译出蛋白质，采用.

个体生物学水平鉴定

如做抗虫或抗病接种实验等

预习检测（限时10分钟）

1．利用PCR将某小段含目的基因的DNA分子扩增循环n次，则（）

A．需要已知目的基因的全部序列以便设计引物

B．共需2n-2个引物参与子代DNA分子的合成

C．应向反应体系中加入解旋酶、DNA聚合酶、缓冲液等

D．理论上第4轮循环产物中含两种引物的DNA片段占7/8

2．NewPhytologist杂志发表了我国科学家有关大豆对盐胁迫响应的分子调控机制，过程如图所示。研究发现，miR160a可通过切割GmARF16基因转录的mRNA使大豆具有耐盐性。下列叙述错误的是