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微生物发酵制药工艺;发酵

发酵制药

发酵制药的基本过程;;;3??发酵制药的基本过程;微生物发酵过程特征

微生物生长动力学

影响动力学的因素

动力学模型;;;;;生长曲线：生物量或细胞数目随培养时间变化曲线。

意义：描述微生物从生长到自溶死亡的整个过程。

生长速率r：单位时间（t）内菌体浓度或质量（X）变化;菌体生物量与时间的关系是S形曲线。

分为五个阶段;;限制性基质浓度与比生长速率（μ）的关系;Kd为分解速率常数，A、Eg为Arrennius常数和活化能，R、T为通用气体常数和绝对温度。;;I型：菌体生长与生产偶联型;II型：生长与生产半偶联型;III型：生长与产物生成非偶联型,;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;概念：

构成微生物细胞和代谢产物中碳素的营养物质。

作用：

为正常生理活动和过程提供能量来源，为细胞物质和代谢产物的合成提供碳骨架。;;;;氨水、铵盐和硝酸盐等。氨盐比硝酸盐更快被利用。

工业应用：主要氮源或辅助氮源；调节pH值

生理酸性物质：代谢后能产生酸性残留物质。

（NH4）2SO4利用后，产生硫酸

生理碱性物质：代谢后能产生碱性残留物质。

硝酸钠利用后，产生氢氧化钠。;;;概念：

维持微生物生长所必需的微量有机物，不起碳源和氮源作用。

种类：

维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶及其衍生物、脂肪酸等。

天然成分中含有：一般无需添加。

营养缺陷型菌株：必需添加。;概念：

加入到发酵培养基中的某些化合物，被直接结合到目标产物分子中，而自身的结构无多大的变化。

使用：

添加前体是提高抗生素产量的重要措施。

多次少量流加的工艺。;概念：

促进产物生成的物质，但不是营养物，也不是前体的一类化合物。

种类：

氯化物有利于灰黄霉素、金霉素合成。

表面活性剂吐温、清洗剂，脂溶性小分子化合物等，起诱导作用。;概念：

降低泡沫的液膜强度和表面黏度，使泡沫破裂的化合物。

种类：表面活性剂，低表面张力。

天然动植物油脂类、高分子化合物（高碳醇脂肪酸和酯类、聚醚类、硅酮类）。

作用：

消除泡沫，防止逃液和染菌。;培养基的种类

按用途：选择性、鉴别性、富营养培养基等

按物理性质：固??，半固体、液体培养基

按化学组成：合成、半合成、天然培养基

按发酵过程中所处位置和作用：斜面或平板固体、种子、发酵和补料培养基。;;;;;;;;;;对发酵的影响：

高黏度的培养基，不易彻底灭菌

影响发酵的通气搅拌等物理过程

直接影响菌体对营养的利用

目标产物的分离提取造成困难

措施：固体不溶性成分，淀粉、黄豆粉等增加培养基的黏度，酶水解，降低大分子物质;;;;;;;无法从生化反应原理来推断和计算出最佳培养基配方：

根据生理学和生物化学理论

参照前人所用的经验培养基

结合菌的特殊生物学和产品特征要求

进行大量细致和周密的试验研究;;;;;1、化学灭菌

2、物理灭菌;;各种物理条件如高温、辐射、超声波及过滤等进行灭菌

紫外线等射线：局部空间

干热灭菌：实验室器皿

蒸汽灭菌：培养基

效果好，操作方便，广泛使用。;1、微生物高温死亡动力学与灭菌的关系

微生物受热死亡过程的一级动力学反应：

－dX/dt=kdX

微生物浓度与灭菌时间成正比，浓度越高，灭菌时间越长。;灭菌时间与比死亡速率之间的关系;;分批操作的灭菌过程;;;（2）连续灭菌操作－流程图

培养基与高压蒸汽直接混匀，达到灭菌温度（130－140℃）;配料：配料罐，配制培养基。

预热罐：定容和预加热。70－90℃。

加热器：培养基与蒸汽混合，快速升到130－140℃。

维持罐：维持灭菌时间,5－7分钟。

冷却管：培养基经过冷却水管冷却。40－50℃。

输入灭菌的发酵罐中。;1）高温快速灭菌工艺，营养成分破坏的少；

2）热能利用合理，易于自动化控制；

3）不适合粘度大或固形物含量高的培养基灭菌；

4）增加了连续灭菌设备及操作环节，增加染菌几率。

5）对压力要求高，一般为0.45-0.8MPa。;;;空气中附着在尘埃上的微生物大小为0.5-5um。

离心场作用：颗粒及其微生物沉降

直接被截留：颗粒惯性碰撞，相互集聚成大颗粒。气流速度越大，惯性越大，截留效果越好。

静电引力：有一定作用。;;5、空气灭菌工艺过程;;;;种子的制备：

种子的逐级扩大培养过程。

获得一定数量和质量的纯种过程。;;;;;;概念：菌体浓度（干重）至少达到50g/L以上的一种理想培养，发酵工艺目标和方向。

优点:

缩小发酵体积

增加表达量

成本低，生产率高。;;;概念：装入大部分培养液，一次性接种，在培养过程中连续不断补充新培养基，但不取出培养液。

特点：

流加能源和碳源物质及氨水等。

克服了批式的缺点，使生长和生产保持适宜水平。

缺点：整个发酵体积不断增加;;概念：培养液一起装入发酵罐，接种后培养