《土壤中分解尿素的细菌的分离和计数》导学案.docVIP

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课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

【学习目标】

1．通过学习选择培养基的应用原理，能够根据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基；

2．通过进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程，能够列举其中涉及的相关技术并会用这些技术解决生产生活中的相关问题。

3．通过实际实验操作，能够运用无菌技术完成微生物的分离、培养和技术各个环节。

【重点难点】

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制

课题难点：对分解尿素的细菌的计数

【知识链接】

1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。

2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、；按照化学性质分为和；

按照用途分为和。

3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。

4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

（1）；（2）。

5.PCR（）是一种在体外将。此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的

【导学过程】

（一）筛选菌株

1.原理：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

2.方法：选择培养基

定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

配制的依据：

①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到。这里的加入是在培养基的培养成分的基础上加入的。

②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。

③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。

④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能得到耐高温的微生物。

讨论1：怎样找到耐高温的酶呢？

讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？

（二）统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

讨论3.完成课本P22页思考题

讨论4.完成课本P22页旁栏思考题？

（三）设置对照

设置对照的主要目的

对照试验的定义：

讨论5.完成课本P23页A同学的两个对照试验？

（四）实验设计

实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

（1）土壤取样

从富含有机物、潮湿、pH≈的土壤中取样。铲去，在距地表约cm的土壤层取样。

（2）制备培养基

准备牛肉膏蛋白胨培养基和用作为氮源的选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

（3）微生物的培养与观察

将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，（是否）更换移液管。对于不同的微生物要选择不同的稀释浓度，测定细菌一般选择，测定真菌一般选择，测定放线菌一般选择