三种核酸的提取与比较.pdfVIP

三种核酸的提取及比较

摘要：分别以绿豆芽幼叶、含100ug/mL氨苄青霉素的LB培养基培养的细菌和绿豆芽幼叶

为材料进行总DNA、质粒DNA和RNA的提取的试验比较，结果表明：用上述的材料可以

提取到较高质量的总DNA,质粒DNA和RNA。

关键词：总DNA，质粒DNA，RNA，提取，检测，电泳

现在，对基因组DNA,质粒DNA,RNA含量的研究已经是成为一种普遍。大

豆作为我国乃至全世界重要的作物，国内外已开展了大量的基础生物学研究和分

子辅助育种研究，以绿豆幼叶提取基因组DNA、以绿豆幼叶提取RNA，是一种

不错的选择，因为在大豆幼嫩叶片中有高含量的DNA，对于基因组DNA、RNA

的全部提取实现率较高。而质粒DNA的提取，我们则选用了、含100ug/mL氨

苄青霉素的LB培养基培养的细菌为材料。

1材料与仪器

1.1实验材料

豆芽，LB培养基菌体

1.2仪器设备

高速冷冻离心机、液氮罐、恒温水浴锅、紫外分光光度计、冰箱、移液枪、PH试纸、高压

灭菌锅、电泳槽等

2试剂

2.1总DNA提取的试剂

2.1.1裂解液100mmol/LTris-HCL（pH8.0），5mmol/LEDTA，500mmol/LNaCl，1.25%SDS，

1%巯基乙醇，1%PVP（聚乙烯吡咯烷酮）。

2.1.2苯酚-氯仿-异戊醇（25：24：1）

2.1.33mol/LNaAc(用冰醋酸调PH至5.2)

2.1.4TE缓冲液100mmol/LTris-HCL（pH8.0），10mmol/LEDTA，配成母液储存。使用

前稀释10倍成为工作液。

2.1.5异丙醇

2.1.6氯仿

2.1.75mg/mLRnase，用水溶解后煮沸10至15min，冷却后贮于-20°C备用。

2.2质粒DNA提取的试剂

2.2.1溶液I50mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCL(pH8.0),10mmol/LEDTA,灭菌后保存于

冰箱中备用。

2.2.2溶液II0.2mol/LNaOH,1%SDS,现配现用。

2.2.3溶液III5mol/LKac60mL,冰乙酸11.5mL，水28.5mL，混匀后存入冰箱备用。

2.2.4LB培养基购现成或按配方配制后分装，灭菌后备用。

2.2.5其他试剂TE缓冲液；溶菌酶；异丙醇；50mg/mL氨苄青霉素；苯酚-氯仿-异戊醇

（25：24：1）；3mol/LNaAc(pH5.2,灭菌后保存)；75%乙醇；分装后存入冰箱中保存备用。

2.3RNA提取的试剂

2.3.1变性液4mol/L异硫氰酸胍，0.5%SDS，0.5%Sarcosyl(N-肉桂酰肌酸钠)，100mmol/L

巯基乙醇，溶于42mmol/L醋酸缓冲液（pH4.2）中，可在65°C加热助溶，过滤后灭菌备

用，可在冰箱中较长时间保存。

2.3.22mol/LNaAc(pH4.0)NaAc16.4g加水70mL,用冰乙酸调至pH4.0,最后定容至100mL.

2.3.3苯酚（酸性酚）-氯仿-异戊醇（25：24：1）.

2.3.4其他试剂异丙醇（于冰箱中预冷）

2.3.50.05%DEPC水溶液1000mL重蒸水加入0.5mL的DEPC，装于棕色瓶中备用，较长

时间保存应放入冰箱中。

2.4电泳试剂

2.4.1TBE电极缓冲液

(1)储存的母液（5XTBE缓冲液）Tris54g，硼酸27.5g，0.5mol/LEDTA(Ph8.0)20mL，溶

于蒸馏水中定容至1000mL。置于4°C下可储存备用，其pH约为8.3.

（2）电泳时的缓冲液（0.5XTBE缓冲液）临用时用水稀释5XTBE缓冲液至0.5XTBE

缓冲液（10倍稀释）。

2.4.20.8%琼脂糖琼脂糖0.32g溶于0.5XTBE缓冲液40mL，微波炉加热融化。

2.4.3Goldview染料。

2.4.4RnaseA（RNA酶A）不含DNA酶RNaseA的10mg/mL,TE配制，沸水加热15分

钟，分装后储存于-20°C。

2.4.56Xloadi