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水质检测与评价
仪器分析法-2
分光光度法的原理
主讲人：赖月婷
一、原理概述
利用物质对光的选择性吸收，可进行定性分析和定量分析。
一定波长下，被测溶液对光的吸收程度与溶液中组分的浓度之间存在定量关系，可进行该组分的含量测定，该定量测定方法称为吸光光度法。
它包括比色法和分光光度法
二、分光光度法的分类
依物质对不同波长范围光的吸收，主要有：
1.1光是一种电磁波，具有波粒二象性。光的波动性可用波长、频率、光速c等参数来描述：=c
1.2光的微粒性可用光子来描述，光子的能量：E=h（Planck常数：h=6.626×10-34J/S)
三、分光光度法基本原理
三、分光光度法基本原理
（1）具有单一波长的光叫单色光，比如红光，蓝光等。
（2）由不同波长的光组成的光叫复色光。比如日光等。
（3）如果两种颜色的单色光按适当的强度比例混合呈白光，则这两种颜色的光叫做互补色光。
1.3有关概念
（4）不同颜色的可见光波长及其互补光
三、分光光度法基本原理
/nm
颜色
互补光
400-450
紫
黄绿
450-480
蓝
黄
480-490
绿蓝
橙
490-500
蓝绿
红
500-560
绿
红紫
560-580
黄绿
紫
580-610
黄
蓝
610-650
橙
绿蓝
650-760
红
蓝绿
三、分光光度法基本原理
1.4物质的颜色与光吸收的关系
三、分光光度法基本原理
三、分光光度法基本原理
三、分光光度法基本原理
2.1相关概念
（1）透过光的强度It与入射光的强度I0之比称为透光度，用T表示。常用百分数表示：T=It/I0
（2）为了表示物质对光的吸收程度，常采用吸光度A这一概念，即透光度倒数的对数值。A=lg（I0/It）=lg（1/T）=－lgT
三、分光光度法基本原理
2.2光的吸收定律(Lambert-Beer定律)
将Lambert定律和Beer定律结合起来，就得到Lambert-Beer定律，此定律也称为光吸收基本定律。其数学表达式为A=kcb；式中k1、k2和k均为比例常数，k随c、b所用单位不同而不同。
如果溶液层厚度b的单位为cm，浓度C单位为g/L，k用a表示，a称为吸光系数，又称为质量吸收系数，单位是L/(g*cm)，则有A=abC
如果溶液层厚度b的单位仍为cm,但浓度单位为mol/L，则常数K用ƹ表示，ƹ称为摩尔吸光系数，其单位是L/(mol*cm),则表达式为A=ƹbC。
朗伯—比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。
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